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文檔簡(jiǎn)介
1、<p> 綜上所述,我們證實(shí)淫羊藿苷刺激了人類成骨細(xì)胞的增殖和分化,這個(gè)刺激效果可能被調(diào)節(jié), 有些部分是通過(guò)BMP—2來(lái)調(diào)節(jié)的。</p><p> BMPs,也就是那個(gè)屬于增長(zhǎng)因子轉(zhuǎn)變因素總科的,是最初作為混合物,也就是那個(gè)引起體外或體內(nèi)骨骼和軟骨構(gòu)造異位來(lái)鑒定的。廣泛的研究已經(jīng)證實(shí)bmp,包括BMP-2,是有效地區(qū)分骨組織,以及骨形成刺激物質(zhì)的因素。這個(gè)家庭(BMPs2--15)中有幾個(gè)成員,他們
2、已經(jīng)發(fā)現(xiàn)了相應(yīng)的基因克隆人類互補(bǔ)的DNA信息庫(kù)。通過(guò)重組基因技術(shù),在充分的基礎(chǔ)研究和臨床試驗(yàn)中,BMPs是可供使用的。最近的研究表明rhBMP-2和rhBMP-7在各種實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)中直接誘導(dǎo)了正交各向異性骨。因此,我們選擇rhBMP-2為淫羊藿甙的陽(yáng)性對(duì)照。目前的研究表明,rhBMP-2不能刺激人的成骨細(xì)胞增殖,但可以一定濃度下通過(guò)增加ALP的活動(dòng)和礦化結(jié)節(jié)的形成來(lái)誘導(dǎo)人類成骨細(xì)胞的分化。這一發(fā)現(xiàn)是與Lecanda F et al相一致的,
3、他報(bào)告了BMP-2的存在,HMSCs的增殖和人類的造骨細(xì)胞是減少的,但是絕大多數(shù)的骨基質(zhì)蛋白的mRNA含量是升高的。另外,在現(xiàn)在研究中最引人注目的還是本研究發(fā)現(xiàn)BMP-2 mRNA在成骨細(xì)胞培養(yǎng)的時(shí)候在淫羊藿甙的反應(yīng)培養(yǎng)基上是增加的。</p><p> 造骨細(xì)胞是個(gè)骨形成細(xì)胞,是I型膠原蛋白的連續(xù)表達(dá),ALP,骨鈣素和細(xì)胞外基質(zhì)的沉積鈣被稱為標(biāo)記物的分化成骨。人類造骨細(xì)胞培養(yǎng)三天,在ALP的活動(dòng)在10—20
4、181;g /毫升的淫羊藿甙中表現(xiàn)出顯著增加,在10—20µg /毫升的淫羊藿甙中的細(xì)胞培養(yǎng)了14天以后,形成的礦化結(jié)節(jié)顯著增加。ALP活動(dòng)的外觀對(duì)于成熟的造骨細(xì)胞來(lái)說(shuō)是早期表型的標(biāo)志,礦化結(jié)節(jié)的形成是成骨細(xì)胞分化的后期標(biāo)志,我們的結(jié)果表明,各級(jí)成骨細(xì)胞從骨先質(zhì)細(xì)胞階段到終端分化階段,受刺激的淫羊藿甙成骨細(xì)胞是有差異的。</p><p> The cell membrane surface serin
5、e/threonine kinase receptor activated on the transformation between GTP and GDP. If ligands and receptor binding too frequent, will appear two possibilities(I) receptor GTP cannot release, GDP cannot into GDP, the next a
6、ctivation signal cannot convey to the cells.(II)Signal system constantly release information, cells arise. Of course cells produce canceration material foundation is not only serine/threonine kinase receptors. This exper
7、iment observed 20,40ng/ml bar</p><p> SMADs TGF super family downstream is signaling pathways. To the weak DPP gene alleles (BMP dominant genes) gene screening, enhance the son found mother againstdpp (Mad
8、) and Medea homozygous Mad variation and variation of the performance, same DPP caused the central tube, embryonic ventral and dorsal shape happen flaw. Mice and people at least 9 Mad and the homologous genes identified
9、with Sma, and shown to form serine/threonine kinase receptor transmission path. In order to simplify the noun na</p><p> The common-mediator-Smad4 of SMADs recursive in very important in SAMD family members
10、. When ligands stimulation and SMADs path restrictive phosphorylation Smad4 path with restrictive, after SMADs form hetero-oligomers. Hetero-oligomers into nuclei and activate the transcription response. In mammals, acti
11、vin Smad4 and TGF- or the type of activated receptor activated Smad2 and Smad3 forming complexes, and be BMP activated receptor type of Smad1, possibly including Smad5 and Smad9 forming complexes</p><p> It
12、 is worth noting,Icariine stimulate the role of osteoblast produce ALP not from Icariine osteoblast contact with the then produce, but when cell proliferation, to a certain degree of in vitro osteoblast began to second d
13、ifferentiation Icariine stimulate the role of osteoblast produce ALP only play out. This time the role of physiological requirements with depend on.</p><p> 2.Extraction total RNA: Abandon to morphology, jo
14、in 8ml blending 5min, and add 1.6ml the chloroform:isoamyl alcohol(49:1), violent shake, centrifugal 12000rp/m,4℃15min;take after qing join isopropyl alcohol, centrifugal, abandon qing, precipitation,join volume fraction
15、 of 75% ethanol,10000rp/m,4℃5min,abandon ethanol, inverted centrifugal tube about 15 minutes, add 100ml DEPC treated water dissolved RNA.</p><p> 3. Retrovirus: take 2mg mRNA , join 1ml Oligo(dT)18(1mg/ml),
16、70℃,immediately after 5min, add ice water bath for 5min, 5ml5xbuffer 、2.5ml dNTP (10mmol/L)、1mlRNA enzyme inhibitors(50U/ml), 3mlAMV reverse transcriptase, 10.5mlDEPC treated water, blending with 42℃,90min ice bath after
17、 termination of reaction.</p><p> 5.Reaction system, each 1ml primer,dNTP0.5ml,Taq enzymes 0.5ml, template 1ml. PCR conditions: 94℃5min 94℃30s、56℃30s、72℃60s, order altogether circulation 30 times, fi
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