LPS致胚胎著床障礙的分子機制及槲皮素的保護作用研究.pdf

1、本試驗旨在研究LPS致胚胎著床障礙的分子機制以及槲皮素的保護作用研究。本文采用體內(nèi)和體外試驗相結(jié)合的方法，研究槲皮素對細菌脂多糖(LPS)誘導(dǎo)小鼠子宮內(nèi)膜細胞Bcl-2/Bax凋亡蛋白表達的影響，以及LPS介導(dǎo)的小鼠子宮內(nèi)膜細胞中TLR4/NF-κB信號通路以及槲皮素的影響。
　　 體內(nèi)試驗將25只孕4d昆明小鼠隨機分為5組，每組5只。于孕4d尾靜脈注射LPS，于孕5～6d每天灌服不同濃度槲皮素。孕7d剖取子宮，制備組織切片觀察

2、病理學(xué)變化，免疫組化法檢測子宮內(nèi)膜細胞Bcl-2/Bax凋亡蛋白的表達。結(jié)果表明，LPS可顯著降低小鼠子宮內(nèi)膜細胞中Bcl-2的陽性表達，顯著提高Bax的陽性表達，明顯降低Bcl-2/Bax的比值。中劑量槲皮素組小鼠子宮內(nèi)膜細胞Bcl-2的陽性表達顯著高于模型組，Bax的表達顯著低于模型組。這些結(jié)果提示，槲皮素可通過調(diào)節(jié)子宮內(nèi)膜細胞中Bcl-2/Bax凋亡蛋白的表達，抑制子宮內(nèi)膜細胞的凋亡，從而緩解LPS對子宮內(nèi)膜細胞的損傷致胚胎著床障

3、礙作用，起到保胎藥效。
　　 體外試驗取孕4.5d小鼠，采用組織塊培養(yǎng)法培養(yǎng)小鼠子宮內(nèi)膜細胞，待細胞鋪板達80％后，LPS處理細胞4h、8h、12h、24h、48h，ELISA檢測培養(yǎng)上清中IL-10和TNF-α的含量變化;提取細胞胞漿和胞核蛋白，Westernblotting檢測胞漿TLR4蛋白和胞核NF-κB蛋白的表達的變化。根據(jù)篩選出的LPS劑量，將細胞分為5組，補充不同濃度槲皮素(10、50、100μmol/L)處理12

4、h后，ELISA檢測培養(yǎng)上清中IL-10和TNF-α的分泌變化;HE染色子宮內(nèi)膜細胞;細胞免疫熒光檢測NF-κB的跨膜表達;Westernblotting檢測胞漿TLR4蛋白和胞核NF-κB蛋白的表達的變化;Westernblotting檢測總蛋白中Bcl-2/Bax蛋白表達的變化。細胞受到LPS作用后，ELISA結(jié)果顯示LPS降低了細胞中IL-10的表達，增加了TNF-α的表達，引起炎癥反應(yīng)，使Th1/Th2偏向于不利妊娠的Th1方向

5、;免疫熒光化學(xué)染色顯示NF-κB蛋白表達由胞質(zhì)向胞核轉(zhuǎn)位;胞漿中TLR4蛋白和胞核NF-κB蛋白的表達變化與LPS作用時間呈正相關(guān)，且兩者表達變化具有同步一致性。補充槲皮素后，增加了細胞中IL-10的表達，降低了TNF-α的表達，抑制炎癥反應(yīng)，使Th1/Th2偏向有利于妊娠的Th2方向;10μmol/L的槲皮素明顯降低了胞漿中TLR4蛋白和胞核NF-κB蛋白的表達，有效地緩解了LPS對細胞的炎癥損傷作用;槲皮素明顯上調(diào)子宮內(nèi)膜細胞中Bc