槲皮素對(duì)Aβ25-35致PC12細(xì)胞損傷的神經(jīng)保護(hù)作用及機(jī)制研究.pdf

1、阿爾茨海默病(Alzheimer's disease，AD)是發(fā)生在老年前期及老年期、以進(jìn)行性認(rèn)知功能障礙和行為損傷為特征的中樞神經(jīng)退行性疾病，主要表現(xiàn)為進(jìn)行性認(rèn)知功能障礙和記憶力減退。其病理特征為細(xì)胞外出現(xiàn)老年斑(senile plaque，SP)和神經(jīng)纖維纏結(jié)(Neurofibrillary tangle，NF)，但AD病因尚不清楚且發(fā)病機(jī)制復(fù)雜，臨床缺乏能夠減少神經(jīng)元死亡和延緩疾病進(jìn)程的藥物。大量臨床和流行病學(xué)證據(jù)表明女性與男性相

2、比有較高的發(fā)病率，表明女性更年期雌激素水平下降可能誘發(fā)AD。研究表明雌激素有提高神經(jīng)元活力和減少Aβ聚集的作用，故雌激素可用于AD的預(yù)防或是治療，但絕經(jīng)后婦女的臨床試驗(yàn)數(shù)據(jù)顯示雌激素療法存在不良反應(yīng)，使其在臨床治療中的應(yīng)用具有局限性。
　　研究發(fā)現(xiàn)采用與雌激素化學(xué)結(jié)構(gòu)類(lèi)似的植物雌激素用于神經(jīng)退行性相關(guān)疾病的治療時(shí)，植物雌激素不僅具有雌激素樣神經(jīng)保護(hù)作用同時(shí)可以降低不良反應(yīng)的發(fā)生，因此有望成為預(yù)防和治療AD的藥物。槲皮素(Querc

3、etin，Que)作為一種黃酮類(lèi)天然化合物，是一種化學(xué)結(jié)構(gòu)和雌激素相似的植物雌激素，可以從多種天然植物或食物中提取，無(wú)明顯毒性和不良反應(yīng)。本課題組的前期研究證實(shí)槲皮素可以通過(guò)結(jié)合雌激素α受體表現(xiàn)出雌激素樣作用，促進(jìn)人乳腺癌MCF-7細(xì)胞系的增殖;對(duì)大鼠海馬和皮層的神經(jīng)元具有保護(hù)作用，提高了神經(jīng)元突觸的數(shù)目及長(zhǎng)度，促進(jìn)突觸的生長(zhǎng)及發(fā)生，從而改善神經(jīng)元細(xì)胞的生長(zhǎng)率和存活率。
　　本研究采用老化的Aβ25-35處理PC12細(xì)胞構(gòu)建AD體

4、外模型，探討槲皮素類(lèi)雌激素樣神經(jīng)保護(hù)作用及相關(guān)機(jī)制，為阿爾茨海默病的藥物治療提供思路和策略。實(shí)驗(yàn)中老化的Aβ25-35與PC12細(xì)胞共孵育24小時(shí)后分別加入陽(yáng)性對(duì)照藥物17β-雌二醇0.1μmol·L-1、金雀異黃素50μmol·L-1和三個(gè)不同濃度的槲皮素(200、300、400μmol·L-1)進(jìn)行藥物干預(yù)24小時(shí)。通過(guò)MTT實(shí)驗(yàn)檢測(cè)槲皮素對(duì)大鼠PC12細(xì)胞Aβ25-35損傷模型活性的影響，通過(guò)細(xì)胞免疫熒光染色法和蛋白質(zhì)免疫印跡法檢

5、測(cè)細(xì)胞模型中雌激素受體α(Estrogen receptorα，ERα)和雌激素受體β(Estrogen receptorβ，ERβ)、細(xì)胞外信號(hào)調(diào)節(jié)激酶1/2(extracellular signal-regulated，p-ERK1/2)、凋亡相關(guān)蛋白Bcl-2、Bax及Caspase-3表達(dá)量的變化。并使用工具藥雌激素受體拮抗劑ICI182，780和MAPKK抑制劑U0126探索槲皮素在AD細(xì)胞損傷模型中發(fā)揮雌激素樣神經(jīng)保護(hù)作用的

6、機(jī)制。
　　實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，隨著Aβ25-35作用濃度的增加，細(xì)胞活力所受抑制程度逐漸加強(qiáng)，與對(duì)照組相比Aβ25-3510μmol·L-1作用細(xì)胞24h后能夠顯著降低細(xì)胞存活率(P＜0.01)。MTT法檢測(cè)細(xì)胞活力結(jié)果表明，與模型組相比，17β-雌二醇、金雀異黃素和三個(gè)不同濃度的槲皮素組的細(xì)胞存活率均顯著增強(qiáng)(P＜0.05)。免疫熒光法和蛋白印跡法結(jié)果顯示，與模型組相比，槲皮素提高ERα和p-ERK1/2蛋白表達(dá)量(P＜0.05)，

7、對(duì)于ERβ蛋白表達(dá)量雖有增加但無(wú)顯著性差異(P＞0.05)。并且在Western blot實(shí)驗(yàn)中實(shí)驗(yàn)組凋亡相關(guān)蛋白Bcl-2/Bax表達(dá)比值增加及Caspase-3蛋白表達(dá)下降(P＜0.05)。當(dāng)槲皮素雌激素受體受到ICI182，780抑制后，p-ERK1/2蛋白表達(dá)下降(P＜0.05)，Bcl-2/Bax比值下降及Caspase-3蛋白表達(dá)增加(P＜0.05)。當(dāng)U0126作用于槲皮素后，Bcl-2/Bax比值下降及Caspase-3