槲皮素對Aβ25-35致PC12細胞損傷的神經(jīng)保護作用及機制研究.pdf

1、阿爾茨海默病(Alzheimer's disease，AD)是發(fā)生在老年前期及老年期、以進行性認知功能障礙和行為損傷為特征的中樞神經(jīng)退行性疾病，主要表現(xiàn)為進行性認知功能障礙和記憶力減退。其病理特征為細胞外出現(xiàn)老年斑(senile plaque，SP)和神經(jīng)纖維纏結(Neurofibrillary tangle，NF)，但AD病因尚不清楚且發(fā)病機制復雜，臨床缺乏能夠減少神經(jīng)元死亡和延緩疾病進程的藥物。大量臨床和流行病學證據(jù)表明女性與男性相

2、比有較高的發(fā)病率，表明女性更年期雌激素水平下降可能誘發(fā)AD。研究表明雌激素有提高神經(jīng)元活力和減少Aβ聚集的作用，故雌激素可用于AD的預防或是治療，但絕經(jīng)后婦女的臨床試驗數(shù)據(jù)顯示雌激素療法存在不良反應，使其在臨床治療中的應用具有局限性。
　　研究發(fā)現(xiàn)采用與雌激素化學結構類似的植物雌激素用于神經(jīng)退行性相關疾病的治療時，植物雌激素不僅具有雌激素樣神經(jīng)保護作用同時可以降低不良反應的發(fā)生，因此有望成為預防和治療AD的藥物。槲皮素(Querc

3、etin，Que)作為一種黃酮類天然化合物，是一種化學結構和雌激素相似的植物雌激素，可以從多種天然植物或食物中提取，無明顯毒性和不良反應。本課題組的前期研究證實槲皮素可以通過結合雌激素α受體表現(xiàn)出雌激素樣作用，促進人乳腺癌MCF-7細胞系的增殖;對大鼠海馬和皮層的神經(jīng)元具有保護作用，提高了神經(jīng)元突觸的數(shù)目及長度，促進突觸的生長及發(fā)生，從而改善神經(jīng)元細胞的生長率和存活率。
　　本研究采用老化的Aβ25-35處理PC12細胞構建AD體

4、外模型，探討槲皮素類雌激素樣神經(jīng)保護作用及相關機制，為阿爾茨海默病的藥物治療提供思路和策略。實驗中老化的Aβ25-35與PC12細胞共孵育24小時后分別加入陽性對照藥物17β-雌二醇0.1μmol·L-1、金雀異黃素50μmol·L-1和三個不同濃度的槲皮素(200、300、400μmol·L-1)進行藥物干預24小時。通過MTT實驗檢測槲皮素對大鼠PC12細胞Aβ25-35損傷模型活性的影響，通過細胞免疫熒光染色法和蛋白質免疫印跡法檢

5、測細胞模型中雌激素受體α(Estrogen receptorα，ERα)和雌激素受體β(Estrogen receptorβ，ERβ)、細胞外信號調節(jié)激酶1/2(extracellular signal-regulated，p-ERK1/2)、凋亡相關蛋白Bcl-2、Bax及Caspase-3表達量的變化。并使用工具藥雌激素受體拮抗劑ICI182，780和MAPKK抑制劑U0126探索槲皮素在AD細胞損傷模型中發(fā)揮雌激素樣神經(jīng)保護作用的

6、機制。
　　實驗結果顯示，隨著Aβ25-35作用濃度的增加，細胞活力所受抑制程度逐漸加強，與對照組相比Aβ25-3510μmol·L-1作用細胞24h后能夠顯著降低細胞存活率(P＜0.01)。MTT法檢測細胞活力結果表明，與模型組相比，17β-雌二醇、金雀異黃素和三個不同濃度的槲皮素組的細胞存活率均顯著增強(P＜0.05)。免疫熒光法和蛋白印跡法結果顯示，與模型組相比，槲皮素提高ERα和p-ERK1/2蛋白表達量(P＜0.05)，

7、對于ERβ蛋白表達量雖有增加但無顯著性差異(P＞0.05)。并且在Western blot實驗中實驗組凋亡相關蛋白Bcl-2/Bax表達比值增加及Caspase-3蛋白表達下降(P＜0.05)。當槲皮素雌激素受體受到ICI182，780抑制后，p-ERK1/2蛋白表達下降(P＜0.05)，Bcl-2/Bax比值下降及Caspase-3蛋白表達增加(P＜0.05)。當U0126作用于槲皮素后，Bcl-2/Bax比值下降及Caspase-3