Hippo通路與自噬共調(diào)節(jié)IUGR新生仔豬肝臟代謝的機(jī)理研究.pdf

1、宮內(nèi)發(fā)育遲緩(Intrauterine growth restriction，IUGR)是指哺乳動(dòng)物妊娠期胚胎或者胎兒及其器官的發(fā)育受阻。作為哺乳動(dòng)物中普遍存在的圍產(chǎn)期并發(fā)癥，IUGR因?yàn)槠漭^高的致病率與致死率、較低的食物利用率以及對(duì)胎兒長(zhǎng)遠(yuǎn)的負(fù)面影響，一直是人類健康及動(dòng)物生產(chǎn)中的一個(gè)嚴(yán)重問(wèn)題，但由于對(duì)其發(fā)生機(jī)制的不甚了解，IUGR的治療和預(yù)防仍然不足，因此充分了解IUGR的發(fā)生及調(diào)控機(jī)制具有重要意義。Hippo信號(hào)通路是一條新發(fā)現(xiàn)的信

2、號(hào)通路，在調(diào)控動(dòng)物器官大小及細(xì)胞生長(zhǎng)發(fā)育方面發(fā)揮著重要作用;自噬在動(dòng)物早期發(fā)育及應(yīng)激條件下的生理意義為人們熟知。本研究旨在探討Hippo信號(hào)通路及自噬是否參與調(diào)控IUGR新生仔豬肝臟的生長(zhǎng)代謝，并初步闡明其作用機(jī)理，為深入了解IUGR提供理論依據(jù)。
　　 本研究分析了IUGR對(duì)新生仔豬肝臟生長(zhǎng)代謝的影響，并通過(guò)分子生物學(xué)與細(xì)胞生物學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)檢測(cè)了Hippo信號(hào)通路、自噬及其相關(guān)信號(hào)通路在IUGR新生仔豬肝臟中的表達(dá)規(guī)律。取得的主

3、要結(jié)果如下:
　　 (1)IUGR新生仔豬肝臟重量與體重比值顯著低于正常新生仔豬(P＜0.05)，表明了IUGR發(fā)生時(shí)，肝臟發(fā)育受阻;血漿游離氨基酸中，BCAA與AAA的比值相比于正常新生仔豬顯著降低(P＜0.05)。對(duì)IUGR新生仔豬肝臟進(jìn)行H&E染色，發(fā)現(xiàn)染色異常，胞質(zhì)空泡化，細(xì)胞排列紊亂。上述結(jié)果均提示IUGR新生仔豬肝臟的損傷;IUGR新生仔豬肝臟相比正常新生仔豬，能量代謝異常，表現(xiàn)為:血漿中葡萄糖濃度極顯著降低(P＜0

4、.01)，肝糖原明顯減少，能量代謝相關(guān)蛋白AMPK的活性極顯著升高(P＜0.01)。
　　 (2)通過(guò)Western blot與免疫組織化學(xué)試驗(yàn)檢測(cè)了Hippo信號(hào)通路在IUGR新生仔豬肝臟中的活性升高，其中，相比正常新生仔豬，IUGR新生仔豬肝臟中MST與LATS1的活性極顯著升高(P＜0.01)，YAP的活性極顯著降低(P＜0.01)。
　　 (3)通過(guò)Western blot與透射電鏡試驗(yàn)檢測(cè)了自噬在IUGR新生仔

5、豬肝臟中的活性降低。透射電鏡檢測(cè)了IUGR新生仔豬肝臟中自噬泡數(shù)量極顯著降低(P＜0.01)，Western blot試驗(yàn)進(jìn)一步說(shuō)明了IUGR新生仔豬肝臟中自噬活性的降低（P＜0.01）。
　　 (4)通過(guò)Western blot試驗(yàn)檢測(cè)了Hippo、自噬的相關(guān)信號(hào)通路Wnt/β-catenin與mTOR的活性極顯著降低(P＜0.01)，同時(shí)也發(fā)現(xiàn)了IUGR新生仔豬肝臟中Wnt/β-catenin信號(hào)通路的Dv12蛋白發(fā)生聚集，

6、表達(dá)量極顯著升高(P＜0.01)。
　　 (5)為了探討IUGR新生仔豬肝臟中自噬活性降低的調(diào)控機(jī)制，通過(guò)Westernblot試驗(yàn)檢測(cè)了mTOR-AMPK-ULK1的相互作用，發(fā)現(xiàn)在IUGR新生仔豬肝臟中，ULK1在Ser555位點(diǎn)的磷酸化水平極顯著降低(P＜0.01)，而Ser757位點(diǎn)在兩組中都未發(fā)現(xiàn)磷酸化，表明了AMPK與ULK1相互作用可能存在缺陷。
　　 綜合上述試驗(yàn)結(jié)果，得出以下結(jié)論:相比于正常新生仔豬，I