Akt磷酸化對(duì)細(xì)胞自噬的調(diào)節(jié)及真菌次級(jí)代謝產(chǎn)物C77影響細(xì)胞自噬和HBV復(fù)制.pdf

1、Akt是一種絲氨酸/蘇氨酸激酶，又稱(chēng)蛋白激酶B(Protein kinase B，PKB)，它位于mTOR的上游，在自噬調(diào)控中通常認(rèn)為起負(fù)調(diào)控作用。而細(xì)胞自噬(Autophagy)是真核生物用于清除胞內(nèi)聚集物、損傷細(xì)胞器而維持其穩(wěn)態(tài)平衡的一種溶酶體降解途徑。細(xì)胞自噬不僅在細(xì)胞生長(zhǎng)發(fā)育、成熟分化等過(guò)程中起重要作用，且與多種疾病發(fā)生、病毒感染與免疫等密切相關(guān)。我們用電鏡、激光共聚焦顯微鏡、免疫印跡檢測(cè)發(fā)現(xiàn)穩(wěn)定表達(dá)HBV基因組的HepG2.2

2、15細(xì)胞自噬較HepG2細(xì)胞顯著增強(qiáng)，說(shuō)明HBV感染能夠增強(qiáng)細(xì)胞基礎(chǔ)自噬，同時(shí)發(fā)現(xiàn)在HepG2.215細(xì)胞中Akt磷酸化水平異常高表達(dá)，這暗示著Akt在細(xì)胞自噬和HBV復(fù)制中起著重要作用，我們用API-2抑制Akt磷酸化后發(fā)現(xiàn)HepG2.215細(xì)胞自噬體減少，LC3脂?；档?。通過(guò)進(jìn)一步的研究發(fā)現(xiàn)，API-2引起的自噬降低是通過(guò)減少自噬基因Beclin1的表達(dá)，降低正調(diào)控自噬基因Erk和GSK的磷酸化實(shí)現(xiàn)的。這一結(jié)果表明Akt正調(diào)控He

3、pG2.215細(xì)胞自噬。同時(shí)進(jìn)一步豐富了Akt信號(hào)通路在細(xì)胞自噬中的理論研究。
　　乙肝病毒（Hepatitis B viru，HBV）感染是嚴(yán)重危害我國(guó)人口健康的常見(jiàn)傳染病之一。統(tǒng)計(jì)顯示，目前我國(guó)HBV感染者達(dá)1.2億。由于長(zhǎng)期的病毒感染，病情反復(fù)發(fā)作，使得肝功能受損，有很多病人最終會(huì)發(fā)展成肝細(xì)胞癌。目前，無(wú)論對(duì)乙肝病毒感染者還是肝癌病人均需要更有效的治療手段，因此對(duì)其病因?qū)W以及新的治療手段的研究顯得尤為重要。化合物Gliocl

4、adicillin C(C77)是分離的Gliocladium sp的發(fā)酵產(chǎn)物中獲得的Epipolythiodioxopiperazines(ETPs)類(lèi)分子。該類(lèi)化合物能抑制腫瘤細(xì)胞增殖，對(duì)細(xì)菌、病毒等病原體有殺傷作用。我們發(fā)現(xiàn)該類(lèi)化合物早期能引起細(xì)胞自噬，而自噬又是HBV復(fù)制所必須的。那C77是否通過(guò)自噬對(duì)HBV復(fù)制產(chǎn)生一定影響昵？通過(guò)定量PCR檢測(cè)表明C77是通過(guò)降低自噬基因的表達(dá)來(lái)抑制HBV-X基因的轉(zhuǎn)錄量，從而影響HBV復(fù)制。

5、
　　Akt促進(jìn)細(xì)胞自噬而自噬又與HBV復(fù)制關(guān)系密切，那Akt是否與HBV復(fù)制有關(guān)系昵？我們用Akt抑制劑API-2發(fā)現(xiàn)既可以抑制HBV的復(fù)制，也可以降低細(xì)胞自噬。激光共聚焦顯微鏡顯示API-2可以減少HepG2.215自噬體的數(shù)量。敲降自噬相關(guān)基因LC3、p62和Beclin1抑制HBV的復(fù)制，而敲降A(chǔ)kt減少了LC3-Ⅱ水平，抑制了病毒的復(fù)制。所以我們的實(shí)驗(yàn)結(jié)論:C77是通過(guò)降低自噬相關(guān)基因表達(dá)來(lái)抑制病毒復(fù)制的。Akt信號(hào)是維