Akt磷酸化對細胞自噬的調(diào)節(jié)及真菌次級代謝產(chǎn)物C77影響細胞自噬和HBV復(fù)制.pdf

1、Akt是一種絲氨酸/蘇氨酸激酶，又稱蛋白激酶B(Protein kinase B，PKB)，它位于mTOR的上游，在自噬調(diào)控中通常認為起負調(diào)控作用。而細胞自噬(Autophagy)是真核生物用于清除胞內(nèi)聚集物、損傷細胞器而維持其穩(wěn)態(tài)平衡的一種溶酶體降解途徑。細胞自噬不僅在細胞生長發(fā)育、成熟分化等過程中起重要作用，且與多種疾病發(fā)生、病毒感染與免疫等密切相關(guān)。我們用電鏡、激光共聚焦顯微鏡、免疫印跡檢測發(fā)現(xiàn)穩(wěn)定表達HBV基因組的HepG2.2

2、15細胞自噬較HepG2細胞顯著增強，說明HBV感染能夠增強細胞基礎(chǔ)自噬，同時發(fā)現(xiàn)在HepG2.215細胞中Akt磷酸化水平異常高表達，這暗示著Akt在細胞自噬和HBV復(fù)制中起著重要作用，我們用API-2抑制Akt磷酸化后發(fā)現(xiàn)HepG2.215細胞自噬體減少，LC3脂?；档?。通過進一步的研究發(fā)現(xiàn)，API-2引起的自噬降低是通過減少自噬基因Beclin1的表達，降低正調(diào)控自噬基因Erk和GSK的磷酸化實現(xiàn)的。這一結(jié)果表明Akt正調(diào)控He

3、pG2.215細胞自噬。同時進一步豐富了Akt信號通路在細胞自噬中的理論研究。
　　乙肝病毒（Hepatitis B viru，HBV）感染是嚴重危害我國人口健康的常見傳染病之一。統(tǒng)計顯示，目前我國HBV感染者達1.2億。由于長期的病毒感染，病情反復(fù)發(fā)作，使得肝功能受損，有很多病人最終會發(fā)展成肝細胞癌。目前，無論對乙肝病毒感染者還是肝癌病人均需要更有效的治療手段，因此對其病因?qū)W以及新的治療手段的研究顯得尤為重要。化合物Gliocl

4、adicillin C(C77)是分離的Gliocladium sp的發(fā)酵產(chǎn)物中獲得的Epipolythiodioxopiperazines(ETPs)類分子。該類化合物能抑制腫瘤細胞增殖，對細菌、病毒等病原體有殺傷作用。我們發(fā)現(xiàn)該類化合物早期能引起細胞自噬，而自噬又是HBV復(fù)制所必須的。那C77是否通過自噬對HBV復(fù)制產(chǎn)生一定影響昵？通過定量PCR檢測表明C77是通過降低自噬基因的表達來抑制HBV-X基因的轉(zhuǎn)錄量，從而影響HBV復(fù)制。

5、
　　Akt促進細胞自噬而自噬又與HBV復(fù)制關(guān)系密切，那Akt是否與HBV復(fù)制有關(guān)系昵？我們用Akt抑制劑API-2發(fā)現(xiàn)既可以抑制HBV的復(fù)制，也可以降低細胞自噬。激光共聚焦顯微鏡顯示API-2可以減少HepG2.215自噬體的數(shù)量。敲降自噬相關(guān)基因LC3、p62和Beclin1抑制HBV的復(fù)制，而敲降A(chǔ)kt減少了LC3-Ⅱ水平，抑制了病毒的復(fù)制。所以我們的實驗結(jié)論:C77是通過降低自噬相關(guān)基因表達來抑制病毒復(fù)制的。Akt信號是維