豬α、β、γ干擾素的表達(dá)及抗病毒活性的檢測.pdf

1、干擾素(Interferon，IFN)是在特定的誘導(dǎo)劑作用下，一類由細(xì)胞分泌的，在同種細(xì)胞上，具有廣譜抗病毒、抗腫瘤和調(diào)節(jié)免疫功能等活性的細(xì)胞因子。其活性受基因的調(diào)控，涉及RNA和蛋白質(zhì)的合成環(huán)節(jié)。自發(fā)現(xiàn)以來，IFN的研究是細(xì)胞因子研究中最活躍、進(jìn)展最快的領(lǐng)域之一，也是病毒學(xué)、細(xì)胞學(xué)、分子生物學(xué)、免疫學(xué)和腫瘤學(xué)等相關(guān)領(lǐng)域的研究熱點(diǎn)。我國是養(yǎng)豬大國，豬的各類疾病，尤其是病毒性疾病一直嚴(yán)重危害著養(yǎng)豬業(yè)的發(fā)展，降低了經(jīng)濟(jì)效益，迫切需要研制高效

2、低成本的抗病毒和增強(qiáng)免疫效果的藥物?；谪iIFN具有廣譜抗病毒、抗腫瘤及免疫調(diào)節(jié)作用，如何有效的將豬IFN應(yīng)用于豬病的防治，已成為研究熱點(diǎn)。豬IFN分為Ⅰ型和Ⅱ型，目前已知并且被廣泛研究的有α、β和γ三種。IFN-α、β屬于Ⅰ型，具有抑制病毒復(fù)制和抗腫瘤的作用；IFN-γ屬于Ⅱ型，除具有抗病毒作用外，參與細(xì)胞主要組織相容性復(fù)合物(Majorhistocompatibilitycomplex，MHC)抗原的表達(dá)和免疫調(diào)節(jié)反應(yīng)，在免疫調(diào)節(jié)中

3、有重要作用。
　　 本實(shí)驗(yàn)?zāi)康氖翘剿髟?、真核表達(dá)的重組豬IFN在不同細(xì)胞系上抑制不同病毒增殖的作用。利用pGEX-6p-1原核表達(dá)載體，構(gòu)建了豬IFN-α、β、γ基因的原核表達(dá)載體，誘導(dǎo)表達(dá)出部分可溶的重組豬IFN蛋白后，進(jìn)行純化。將蛋白免疫BALB/c小鼠，分別制備了效價(jià)在1:10,000以上的豬IFN-α、β、γ多克隆抗體。同時(shí)將豬IFN-α、β、γ基因連接到轉(zhuǎn)移載體pFastBacTMHTB上，構(gòu)建了豬IFN-α、β、γ

4、重組Bacmid桿狀病毒載體，利用Bac-To-Bac桿狀病毒表達(dá)系統(tǒng)，在sf9昆蟲細(xì)胞中成功表達(dá)出重組豬IFN-α、β、γ蛋白。用細(xì)胞病變抑制法，在PRRSV(豬繁殖與呼吸綜合征病毒)/Marc-145和VSV(水泡性口炎病毒)/MDBK系統(tǒng)上對(duì)原核和真核表達(dá)的重組豬IFN-α、β、γ蛋白進(jìn)行抗病毒活性檢測。結(jié)果表明，原核和真核表達(dá)的重組豬IFN-α、β、γ蛋白都具有顯著的抗PRRSV和VSV的活性。其中，重組豬IFN-α抗病毒活性較