平邑甜茶凋亡基因BAG,DAD和HSP70的克隆及其對鎘和滲透脅迫的響應.pdf

1、平邑甜茶(Malus hupehensis(Pamp) Rehd.varpinyiensis Jiang)是我國特有的植物資源，常用作蘋果和觀賞海棠的砧木。本研究以平邑甜茶為試材，克隆了MhBAG，MhDAD和MhHSP70基因的全長cDNA序列，并運用生物信息學手段分析了其基因序列與編碼蛋白的性質(zhì)和功能；同時，研究了它們在重金屬、鹽及干旱脅迫下的表達情況，并對細胞凋亡率進行了測定。成功構(gòu)建了MhBAG，MhDAD基因正反義表達載體并轉(zhuǎn)

2、化擬南芥，獲得轉(zhuǎn)基因擬南芥植株。主要結(jié)果如下：
　　 1)獲得了平邑甜茶MhBAG基因，該基因cDNA全長1841bp，含有1017的完整開放閱讀框，編碼338個氨基酸，GenBank登錄號為HQ639935。
　　 2)獲得了平邑甜茶MhDAD基因，該基因cDNA全長546bp，含有360的完整開放閱讀框，編碼119個氨基酸，GenBank登錄號為JN390964。
　　 3)獲得了平邑甜茶MhHSP70基因，

3、該基因cDNA全長2307bp，含有1953的完整開放閱讀框，編碼650個氨基酸，GenBank登錄號為HQ876864。
　　 4)半定量RT-PCR結(jié)果表明，在硫酸鎘脅迫、鹽脅迫以及干旱脅迫下，隨脅迫程度的加劇，MhBAG、MhDAD的表達量逐漸下降，MhHSP70的表達量則呈現(xiàn)上升趨勢，測定細胞凋亡率亦逐漸增加。
　　 5)構(gòu)建了pET-30a-MhBAG原核表達載體，進行了原核表達實驗，測定MhBAG蛋白大小為3