黃顙魚卵致病性綿霉的分離鑒定與感染機(jī)制的研究.pdf

1、黃顙魚是一種名優(yōu)淡水經(jīng)濟(jì)魚類,在我國廣泛養(yǎng)殖且具有很大的市場前景[1、2]。然而,水霉病常引起人工孵化過程中大量的黃顙魚受精卵死亡,導(dǎo)致黃顙魚的苗種供應(yīng)緊缺。因此,開展水霉病的研究具有重要的生產(chǎn)性意義。2011年6月份,湖北省仙桃市某孵化場的黃顙魚卵由于感染水霉病,給該場帶來了嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失。鑒此,本論文對(duì)該水霉病進(jìn)行了病原的分離和鑒定,測定了中草藥和防霉劑對(duì)其的最小抑菌濃度,并初步研究了黃顙魚卵水霉病的感染機(jī)制。本文有如下主要研究結(jié)果

2、:
　　1.菌株YC的分離鑒定
　　從患水霉病的黃顙魚卵上分離到8株絲狀真菌,經(jīng)人工感染證實(shí)菌株YC對(duì)黃顙魚卵具有致病性,并通過態(tài)學(xué)特征和ITS rDNA序列分析對(duì)致病菌株進(jìn)行鑒定。結(jié)果表明,菌株YC的孢子囊多呈圓筒形、棍棒形或穗狀,孢子發(fā)育成熟后不斷從孢子囊頂端釋放出來,成團(tuán)聚集在孢子囊口,并經(jīng)過一個(gè)時(shí)期的靜休后,成團(tuán)脫落或直接分散在水中游動(dòng);次生孢子囊具有典型的側(cè)生現(xiàn)象;藏卵器呈球形或梨形,大多與雄器異枝,少數(shù)與雄器同枝

3、,含1-15個(gè)卵孢子;成熟卵孢子中生或亞中生,偏生一個(gè)大油球。其 ITS rDNA序列與GenBank中綿霉屬自然聚類,且與異絲綿霉(Achlya klebsiana)菌株CBS101.49(GenBank登錄號(hào):AF119579)的親緣關(guān)系最近。結(jié)合以上形態(tài)特征與系統(tǒng)發(fā)育鑒定的結(jié)果,判定菌株YC為異絲綿霉(Achlya klebsiana)。
　　2.菌株YC的簡易保藏
　　為有效保藏異絲綿霉YC,本文建立了一種簡易高效的

4、保藏方法:先將誘生菌絲的油菜籽放入滅菌的5 mL離心管,接著在離心管中加入4.8 mL的無菌蒸餾水,或加入3.8 mL的無菌蒸餾水和1 mL的液體沙氏培養(yǎng)基,最后置于4℃保藏。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,該方法可以有效保藏異絲綿霉YC至少1年以上,且復(fù)蘇率為100％。該保藏方法與傳代培養(yǎng)保藏法相比保藏期更長,與冷凍干燥保藏法相比操作更簡易,成本更低,占用空間少,是一種簡易高效的保藏致病性水霉病病原的的方法。
　　3.菌株YC對(duì)黃顙魚卵感染機(jī)制的

5、初步研究
　　通過接種不同濃度水霉菌孢子懸液,研究水霉孢子濃度與魚卵水霉病爆發(fā)的關(guān)系,同時(shí)研究了水溫與水霉病爆發(fā)的關(guān)系;并進(jìn)一步通過人工感染,觀察了異絲綿霉YC對(duì)黃顙魚卵的感染過程。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明:1)魚卵水霉病的感染是通過水體中的孢子感染的,并可在魚卵之間傳播;2)本試驗(yàn)條件下,孵化剛開始,就有孢子開始附著魚卵;3)附著在死卵的孢子快速萌發(fā),形成太陽籽,并大約經(jīng)過20 h第一次開始釋放孢子;4)附著在活卵上的孢子只萌發(fā)出一個(gè)小芽,

6、或極少數(shù)無序生長;5)當(dāng)孵化水中有孢子游動(dòng)時(shí),可以觀察到死卵周圍的孢子濃度比活卵周圍的孢子濃度高;6)在黃顙魚卵孵化的48 h內(nèi),水體中濃度與黃顙魚卵水霉病發(fā)病率呈正相關(guān)關(guān)系,水霉病的感染率均隨著孢子濃度的增加而增加,且各濃度組之間差異顯著;7)在黃顙魚卵孵化的48 h后,孢子濃度不低于100個(gè)/mL的濃度組中的水霉病感染率隨著時(shí)間的延長各處理組水霉病感染率差異不大,并在孵化后48-60 h開始爆發(fā)水霉病,且起始孢子濃度越高,爆發(fā)越早。