水稻條紋病毒NSvc2基因產(chǎn)物的原核表達(dá)、抗體制備及特性分析.pdf

1、由灰飛虱傳播水稻條紋病毒（Rice stripe virus，RSV）引起的水稻條紋葉枯病是目前水稻生產(chǎn)上的重要病毒病，該病在我國的分布極為廣泛，給水稻生產(chǎn)帶來巨大的損失。目前，灰飛虱傳播RSV的機(jī)制還不清楚，研究灰飛虱傳毒機(jī)制對于切斷病毒的傳播、控制該病毒病害具有重要意義。由于RSV與TSWV(Tomato Spotted Wilt Virus，TSWV)的基因組結(jié)構(gòu)相似，并且RSV編碼的NSvc2蛋白與TSWV的膜糖蛋白（參與薊馬傳

2、播的決定因子）相對應(yīng)，因此，作者推測NSvc2很可能是RSV參與介體灰飛虱傳播的決定因子。
　　 為了弄清NSvc2的功能，本研究首先分析該基因的拓?fù)浣Y(jié)構(gòu)，采用RT-PCR從感染RSV的水稻中克隆獲得基因R-GN、R-GC、 R-GNS和R-GCS。借助原核表達(dá)載體構(gòu)建了R-GN、R-GC、R-GNS和R-GCS的融合蛋白原核表達(dá)重組子，轉(zhuǎn)化大腸桿菌（Escherichiacoli）BL21(DE3)并誘導(dǎo)表達(dá)，SDS-PAGE

3、檢測其表達(dá)產(chǎn)物與預(yù)期結(jié)果大小一致。進(jìn)一步制備了R-GNS和R-GCS的抗血清，Western-blot結(jié)果顯示，所制備的抗血清能與誘導(dǎo)表達(dá)的融合蛋白發(fā)生特異性反應(yīng)。然后利用獲得的抗血清檢測了NSvc2蛋白在RSV感病水稻和帶毒灰飛虱中的表達(dá)情況，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，NSvc2蛋白在水稻和灰飛虱體內(nèi)以2種不同的形式存在，在水稻中NSvc2蛋白存在切割現(xiàn)象，被切割成2個蛋白R-GN(40kDa)和R-GC（53或56 kDa），在灰飛虱體內(nèi)NSvc2

4、的產(chǎn)物不再被切割，而以94 kDa的完整蛋白形式存在。本研究應(yīng)用酵母雙雜交技術(shù)分析了RSV-CP與NSvc2基因產(chǎn)物R-GN、R-GC之間的互作關(guān)系，結(jié)果顯示，R-GN、R-GC蛋白均與RSV-CP存在互作關(guān)系，而R-GN和R-GC之間不存在互作關(guān)系，這為證明NSvc2是RSV參與灰飛虱傳播的決定因子這一推測打下了基礎(chǔ)。
　　 此外，本論文還以實驗室多代篩選獲得的高帶毒(RSV)灰飛虱群體為材料參與構(gòu)建了酵母雙雜交cDNA文庫。