棉花黃萎病菌Vd08284弱毒相關(guān)病毒研究.pdf

1、棉花黃萎病是世界性土傳維管束萎蔫病害，是棉花生產(chǎn)的限制因子之一。我國(guó)棉花黃萎病的病原菌為大麗輪枝菌(VerticilliumdahliaeKleb.)，研究黃萎病菌是否含有弱毒相關(guān)真菌病毒，對(duì)黃萎病的生物防治具有較大的潛在意義。本文對(duì)我國(guó)棉花主產(chǎn)區(qū)12個(gè)省162個(gè)黃萎病菌株進(jìn)行致病力測(cè)定，篩選出51個(gè)弱毒菌株，并對(duì)其進(jìn)行dsRNA檢測(cè)和分析，發(fā)現(xiàn)弱毒菌株Vd08284的dsRNA提取液中存在2條dsRNA條帶。
　　采用改進(jìn)的利用

2、隨機(jī)引物擴(kuò)增RNA病毒的cDNA全長(zhǎng)序列方法獲得2條dsRNA的cDNA全長(zhǎng)。DNA測(cè)序結(jié)果得到2條序列信息，根據(jù)片段大小依次命名為dsRNA1(1769bp)和dsRNA2(1603bp)。dsRNA1和dsRNA2序列信息已經(jīng)在NCBI數(shù)據(jù)庫(kù)中登記，登記號(hào)分別為KC422244.1和KC422243.1。編碼蛋白序列經(jīng)Blast-P檢索結(jié)果顯示，dsRNA1和dsRNA2編碼蛋白分別與Partitivirus屬病毒的依賴于RNA的R

3、NA聚合酶(RdRP)、外殼蛋白(CP)有較高同源性。將該病毒暫命名為Verticilliumdahliaepartitivirus1(VdPV1)，VdPV1的RdRP和CP的氨基酸序列與Chrysoviridae、Totiviridae和Partitiviridae3個(gè)科19種病毒的RdRP和CP分別建立進(jìn)化樹(shù)，VdPV1均與Partitiviridae中雙分病毒屬的病毒聚在一枝，進(jìn)一步說(shuō)明從菌株Vd08284中分離到的病毒VdPV

4、1屬于雙分病毒屬中的新成員。
　　通過(guò)含病毒VdPV1菌株Vd08284與潮霉素標(biāo)記的黃萎病菌突變體菌株T692對(duì)峙培養(yǎng)，成功獲得30個(gè)傳毒菌株，可判定病毒VdPV1在棉花黃萎病菌中能夠在不同菌株間傳播。通過(guò)對(duì)其生物學(xué)特性研究，發(fā)現(xiàn)菌株T692被病毒VdPV1侵染后，能夠?qū)е轮虏×?、菌絲生長(zhǎng)速率和粗毒素分泌量顯著降低，可初步推斷病毒VdPV1對(duì)棉花黃萎病菌具有一定的弱毒影響。根據(jù)病毒VdPV1具有的傳播能力和弱毒特性，推斷該病毒具