棉花黃萎病菌致病類型快速檢測技術(shù)的研究.pdf

1、棉花黃萎病菌根據(jù)引起的癥狀類型和分子生物學(xué)特點(diǎn)，可以分為落葉型黃萎病菌和非落葉型黃萎病菌，落葉型黃萎病菌造成的危害遠(yuǎn)遠(yuǎn)大于非落葉型黃萎病菌，建立一套不經(jīng)對(duì)病原物進(jìn)行分離培養(yǎng)就能快速檢測土壤、植株和種子內(nèi)棉花黃萎病菌致病類型的方法，對(duì)于棉花黃萎病菌的檢測、診斷、檢疫、抗病育種及品種合理布局都具有十分重要的意義。本文用試劑盒對(duì)土壤、植株及種子的總DNA進(jìn)行提取，用落葉型特異性引物DB19/DB22、DB19/espdef01和非落葉型特異性

2、引物NDf/NDr、InND2f/InND2r，通過巢式PCR擴(kuò)增建立起了一套棉花黃萎病菌的快速檢測技術(shù)，可以對(duì)土壤、植株、種子內(nèi)的黃萎病菌及其致病類型進(jìn)行快速檢測，并具有高度的準(zhǔn)確性和特異性。
　　 土壤檢測查明，用Soil DNA Isolation kit（MOBIOLaboratories,Inc生產(chǎn)）對(duì)帶菌土壤總DNA進(jìn)行提取，用上述引物可準(zhǔn)確地檢測出土壤中的黃萎病菌及其致病類型，對(duì)落葉型土壤檢測下限為土壤中菌量密度為

3、103個(gè)孢子/克，對(duì)非落葉型土壤檢測下限為土壤中菌量密度為104個(gè)孢子/克。當(dāng)帶菌土樣經(jīng)過7天的保濕培養(yǎng)后進(jìn)行檢測，無論對(duì)落葉型土壤還是非落葉型土壤，都可以檢測出黃萎病菌，這是因?yàn)槌睗裢寥烙欣摼姆敝乘隆?br>　　 用Dneasy plant Mini Kit（QIAGEN）對(duì)感病植株的總DNA進(jìn)行提取，用以上引物進(jìn)行巢式PCR擴(kuò)增，不僅可以準(zhǔn)確地鑒定發(fā)病植株內(nèi)黃萎病菌及其致病類型，同時(shí)還可準(zhǔn)確檢測顯癥前植株體內(nèi)黃萎病菌及其致病

4、類型。通過對(duì)發(fā)病前不同時(shí)期棉花根、莖、葉進(jìn)行檢測表明，在棉花葉片顯癥前5-10天，可以從根和莖中檢測到落葉型黃萎病菌，在棉花葉片顯癥前10-15天可以檢測到非落葉型黃萎病菌，并可檢測病菌在植株體內(nèi)存在的位置。
　　 對(duì)種子的檢測表明，用Dneasy plant Mini Kit（QIAGEN）試劑盒對(duì)種子總DNA進(jìn)行提取后，通過該技術(shù)可以檢測出1粒以上帶病棉種內(nèi)黃萎病菌的致病類型，通過對(duì)種子不同部位的檢測發(fā)現(xiàn)，在短絨和種殼中都可

5、以檢測到黃萎病菌的存在，并可鑒定出其致病類型，但從胚乳中沒有檢測出黃萎病菌的存在。
　　 采用此法對(duì)南北疆各植棉團(tuán)場采集送檢的病株和重病田病土進(jìn)行檢測查明，在成功檢測的128個(gè)病株樣中，落葉型菌株33個(gè)，非落葉型菌株95個(gè)，它們分別占供測樣品的25.8％和74.2％；在成功檢測的192份重病田的病土中，落葉型菌株57個(gè)，非落葉型菌株135個(gè)，落葉型和非落葉型菌株分別占供測樣品的29.7％和70.3％。兩者所占比例基本吻合?？梢娐?/p>