二點(diǎn)委夜蛾高毒力蘇云金芽胞桿菌殺蟲毒素的篩選及其殺蟲機(jī)理的研究.pdf

1、為了篩選對(duì)二點(diǎn)委夜蛾(Athetis lepigone Moschler)幼蟲高毒力的蘇云金芽胞桿菌殺蟲毒素，采用生物測定的方法，分別對(duì)5株蘇云金芽胞桿菌(Bacillus thuringiensis，簡稱Bt)菌株和4種Bt毒素（Cry1 Ac、Cry1Ab、Cry2Ab、Vip3A）的殺蟲活性進(jìn)行了評(píng)價(jià)，并對(duì)這些菌株的基因型進(jìn)行了分析，篩選得到了對(duì)二點(diǎn)委夜蛾幼蟲具有較高殺蟲活性的菌株Bt SC-40和BtHD-73;在同樣濃度下，對(duì)

2、二點(diǎn)委夜蛾幼蟲殺蟲活性最高的是Cry1Ac和Cry1Ab蛋白，處理72h幼蟲平均校正死亡率分別達(dá)到82.9％和79.2％，其次是營養(yǎng)期殺蟲蛋白Vip3A，72h的致死率為50％，Cry2Ab殺蟲活性最低，處理72h對(duì)幼蟲僅有37.5％的致死率。Cry1Ab和Cry1Ac對(duì)二點(diǎn)委夜蛾幼蟲的LC50分別為0.89μg/g和1.22μg/g。
　　為了明確Bt毒素的作用機(jī)理，提取了二點(diǎn)委夜蛾4齡幼蟲中腸刷狀緣膜囊泡(brush bord

3、er membrane vesicles，BBMV)蛋白，通過點(diǎn)雜交方法驗(yàn)證了Cry1Ab和Cry1Ac毒素的作用標(biāo)靶位于中腸BBMV上，通過Ligand blotting分析結(jié)合蛋白質(zhì)譜鑒定，表明其結(jié)合蛋白為氨肽酶N(Aminopeptidase N，APN)類蛋白。
　　利用透射電子顯微鏡(TEM)分別觀察并比較了二點(diǎn)委夜蛾幼蟲取食含有4種Bt毒素（Cry1Ac、Cry1Ab、Cry2Ab、Vip3A）的飼料后中腸細(xì)胞的病理學(xué)