杉木EST-SSR標(biāo)記的開發(fā)與應(yīng)用.pdf

1、杉木(Cunninghamia lanceolata(Lamb.) Hook.)是我國南方重要的速生用材樹種。為了開發(fā)有效的分子標(biāo)記，用于杉木遺傳多樣性和分子輔助育種的研究與應(yīng)用，本研究分析杉木轉(zhuǎn)錄組序列的SSR分布情況，設(shè)計(jì)其相應(yīng)的EST-SSR引物，并利用篩選出的多態(tài)性引物對(duì)來自11個(gè)原產(chǎn)地的150株杉木無性系進(jìn)行基因型分析。在EST-SSR位點(diǎn)連鎖不平衡和供試材料群體結(jié)構(gòu)分析的基礎(chǔ)上，利用TASSEL軟件，對(duì)獲得的分子標(biāo)記與杉木無

2、性系的3個(gè)重要表型性狀進(jìn)行關(guān)聯(lián)分析。主要研究結(jié)果如下：
　　 ⑴杉木無性系生長材性相關(guān)性狀的系統(tǒng)分析表明，150個(gè)無性系的基本密度一般分布在0.3123-0.3454 g.cm-3之間，心邊材比值大多數(shù)分布在1.9824-3.0652之間，胸徑在21.22-27.02 cm之間。對(duì)杉木個(gè)體間及11個(gè)原產(chǎn)地間的生長材性相關(guān)性狀分別進(jìn)行方差分析。結(jié)果得出:杉木心邊材比值在個(gè)體間差異不顯著，而胸徑和基本密度在個(gè)體間差異顯著;在11個(gè)原

3、產(chǎn)地間，胸徑和心邊材比值差異顯著，而基本密度差異不顯著。
　　 ⑵利用MISA軟件對(duì)83248條杉木轉(zhuǎn)錄組序列進(jìn)行SSR位點(diǎn)的發(fā)掘，其中含SSR位點(diǎn)的序列7129條，SSR位點(diǎn)8628個(gè)，發(fā)生頻率為8.36％，三核苷酸重復(fù)是最主要的SSR類型，占56.88％。105對(duì)引物的篩選結(jié)果顯示，95對(duì)EST-SSR引物能擴(kuò)增出理想的PCR產(chǎn)物，其中有30對(duì)引物揭示出多態(tài)性。
　　 ⑶30對(duì)多態(tài)性引物擴(kuò)增獲得的等位基因數(shù)最多為6個(gè)

4、，最少為2個(gè)，平均等位基因數(shù)為2.47。30個(gè)微衛(wèi)星標(biāo)記的多態(tài)性信息含量(PIC)為0.0134-0.4752，平均為0.3074。POPGENE結(jié)果表明150個(gè)杉木無性系的有效等位基因平均數(shù)為1.5350，Shannon多樣性指數(shù)為0.5120。群體遺傳結(jié)構(gòu)分析將150個(gè)杉木無性系劃分為4個(gè)亞群。通過關(guān)聯(lián)分析，發(fā)現(xiàn)有1個(gè)與密度顯著關(guān)聯(lián)的位點(diǎn)。研究結(jié)果表明，利用杉木EST序列開發(fā)的EST-SSR引物能夠應(yīng)用于杉木的遺傳多樣性分析，相關(guān)的