斑馬魚(yú)補(bǔ)體調(diào)節(jié)因子RCA group 2基因簇與CD59基因的鑒定、表達(dá)和功能研究.pdf

1、補(bǔ)體是先天性免疫系統(tǒng)重要的組成部分，它的激活受體內(nèi)一系列補(bǔ)體調(diào)節(jié)因子精密的調(diào)控，以防補(bǔ)體的過(guò)度激活對(duì)機(jī)體細(xì)胞造成損傷，同時(shí)也避免補(bǔ)體成分的浪費(fèi)。補(bǔ)體的調(diào)控主要集中在C3轉(zhuǎn)化酶的形成、穩(wěn)定和攻膜復(fù)合體形成的關(guān)鍵步驟上。在人中，調(diào)節(jié)C3轉(zhuǎn)化酶的補(bǔ)體調(diào)節(jié)因子的基因都緊密連鎖在1號(hào)染色體的長(zhǎng)臂上(1q32)，稱(chēng)為補(bǔ)體激活調(diào)節(jié)因子RCA基因簇，這個(gè)基因簇可以分為group1和group2；而調(diào)節(jié)攻膜復(fù)合體形成的關(guān)鍵補(bǔ)體調(diào)節(jié)因子是CD59。最近在斑

2、馬魚(yú)中已經(jīng)有RCA group1基因簇的相關(guān)報(bào)道，而其他的補(bǔ)體調(diào)節(jié)因子尚無(wú)報(bào)道。為了完善對(duì)斑馬魚(yú)補(bǔ)體調(diào)節(jié)機(jī)制的了解，本文對(duì)斑馬魚(yú)RCAgroup2基因簇和CD59基因開(kāi)展了研究。我們發(fā)現(xiàn)并克隆出了RCA group2基因簇的兩個(gè)基因(ZRC1和ZRC2)和CD59基因，它們具有與高等動(dòng)物相關(guān)基因相似的基因和蛋白特征，且它們呈母源性表達(dá)，尤其是ZRC1，可能在胚胎發(fā)育的早期通過(guò)母源傳遞來(lái)起保護(hù)作用。
　　 斑馬魚(yú)RCA group

3、2基因簇的兩個(gè)基因ZRC1和ZRC2相鄰，并與PFKFB1基因緊密連鎖，而位于PFKFB2基因下游17 Mkb處，這與蛙、雞和人的RCAgroup2基因簇稍有不同。但是，RCA group2基因相對(duì)于PFKFB2基因的方向和斑馬魚(yú)RCA group2基因編碼蛋白的順序與蛙，雞和人的相一致。ZRC1和ZRC2彼此之間具有71.1％的一致性，說(shuō)明它們是在魚(yú)類(lèi)從與哺乳動(dòng)物共同的祖先中分化出來(lái)之后通過(guò)基因復(fù)制產(chǎn)生的。ZRC1和ZRC2分別編碼一

4、個(gè)I型膜蛋白和可溶性蛋白，兩者具有不同的表達(dá)譜，這說(shuō)明它們可能已經(jīng)發(fā)生了功能性的分化。此外，LPS能夠顯著的上調(diào)ZRC2基因的表達(dá)，說(shuō)明ZRC2可能與急性時(shí)相反應(yīng)有關(guān)。
　　 斑馬魚(yú)CD59基因所編碼的蛋白由N-端25個(gè)氨基酸組成的信號(hào)肽、C-端21個(gè)氨基酸組成的GPI錨定區(qū)域和中間的LU結(jié)構(gòu)域組成。成熟的斑馬魚(yú)CD59蛋白具有保守的10個(gè)半胱氨酸殘基，使得斑馬魚(yú)CD59具有與人CD59相似的三維結(jié)構(gòu)，對(duì)功能的發(fā)揮非常重要。唯一

5、與哺乳動(dòng)物不同的是斑馬魚(yú)CD59它沒(méi)有斑馬魚(yú)補(bǔ)體調(diào)節(jié)因子RCA group2基因簇與CD59基因的鑒定、表達(dá)和功能研究N-糖基化位點(diǎn)，這與其他魚(yú)類(lèi)CD59情況一致，推測(cè)N-糖基化修飾對(duì)硬骨魚(yú)CD59功能的發(fā)揮可能并非必須的。直線同源分析顯示斑馬魚(yú)CD59基因與FBXO3基因緊密連鎖，且細(xì)胞定位分析顯示斑馬魚(yú)CD59基因編碼的蛋白主要以膜蛋白的形式在細(xì)胞膜上表達(dá)，這些都與其他高等物種相似。不過(guò)與高等動(dòng)物不同的是，斑馬魚(yú)CD59在mRNA水