芳基-N-甲基氨基甲酸酯類殺蟲劑多殘留免疫檢測方法的建立與應(yīng)用.pdf

1、本研究以苯酚、雙光氣和6-氨基正己酸為原料合成了半抗原6-(苯氧基羰基)氨基-1-己酸(HA);以3-甲基苯酚、雙光氣和3-氨基丙酸為原料合成了半抗原B-(間-甲基苯氧基羰基)氨基丙酸(HB)。HA用活潑酯法與牛血清白蛋白(BSA)偶聯(lián)得到通用免疫原HA-BSA,結(jié)合比為42:1;HA和HB用活潑酯法分別與卵清蛋白(OVA)偶聯(lián)得到包被抗原HA-OVA和HB-OVA,結(jié)合比依次為23:1和17:1。 以芳基-N-甲基氨基甲酸酯類

2、殺蟲劑通用免疫原HA-BSA免疫BALB/c小鼠,經(jīng)多次免疫后檢測小鼠血清效價(jià)并選擇效價(jià)較高的小鼠,應(yīng)用雜交瘤技術(shù),用PEG法將其脾細(xì)胞與小鼠骨髓瘤細(xì)胞SP2/0進(jìn)行融合,經(jīng)ELISA法篩選及有限稀釋法亞克隆化,建立可穩(wěn)定分泌抗芳基-N-甲基氨基甲酸酯類殺蟲劑的雜交瘤細(xì)胞株。結(jié)果獲得了三株可穩(wěn)定分泌抗芳香類氨基甲酸酯農(nóng)藥的雜交瘤細(xì)胞株(20-G8、3-E2和23-E5),所分泌的抗體均為IgM、κ型,親和常數(shù)分別達(dá)2.15×108L/m

3、ol,1.43×108L/mol和8.04×107L/mol。其中細(xì)胞株20-G8所分泌的抗體對混滅威、滅除成、滅殺成、甲萘威等芳基-N-甲基氨基甲酸酯類殺蟲劑具有明顯的識別作用,為建立該類農(nóng)藥的多殘留分析奠定了基礎(chǔ)。 以成功制備的雜交瘤細(xì)胞株20-G8所分泌的抗芳基-N-甲基氨基甲酸酯類殺蟲劑單克隆抗體為基礎(chǔ),通過對檢測體系中鹽離子強(qiáng)度、pH值、有機(jī)溶劑等影響因子的研究建立了混滅威、滅除威、滅殺威以及甲萘威的ELISA檢測體系

4、.以Logit(B/B0)作縱坐標(biāo)與農(nóng)藥濃度的對數(shù)值作橫坐標(biāo)建立標(biāo)準(zhǔn)曲線,混滅威在0.001μg/L～100μg/L,范圍內(nèi)呈顯著線性關(guān)系,檢測方程為y=-0.9573x-0.3176,相關(guān)系數(shù)R2達(dá)0.9943,在自來水,土壤以及青菜中的添加回收率分別為101.6％、87.7％和90.4％；滅除威在0.001μg/L～100μg/L范圍內(nèi)呈顯著線性關(guān)系,檢測方程為y=-0.9185x-0.1698,相關(guān)系數(shù)R2達(dá)0.9954,在自來水

5、、土壤以及青菜中的添加回收率分別為108.8％、84.6％和92.2％；滅殺威在0.01μg/L～100μg/L范圍內(nèi)呈顯著線性關(guān)系,檢測方程為y=-0.9647x+0.0305,相關(guān)系數(shù)R2達(dá)0.9944,在自來水、土壤以及青菜中的添加回收率分別為97.2％、84.2％和90.9％；甲萘威在0.01μg/ml～100μg/ml范圍內(nèi)呈顯著線性關(guān)系,檢測方程為y=-0.9094x-0.2513,相關(guān)系數(shù)R2達(dá)0.9955,在自來水、土壤