喹諾酮類獸藥殘留的酶聯(lián)免疫檢測方法的研究與建立.pdf

1、喹諾酮是一類合成抗生素類藥物，英文名稱：quinolones(QNs)。在化學上與萘啶酮酸相關(guān)，其作用機理是直接作用于細菌的核、抑制細菌的DNA旋轉(zhuǎn)酶，使酶不能在DNA雙鏈上引入切口，破壞細菌的代謝和繁殖，迅速殺滅細菌。最初這類藥物用于治療尿道感染，現(xiàn)在已發(fā)展到治療系統(tǒng)感染疾病，并且在動物飼養(yǎng)中作為預防和治療藥物普遍使用。近年來，這些藥物在動物組織中的殘留已引起廣泛的注意。 通過將諾氟沙星烷基化合成諾氟沙星衍生物，經(jīng)過紫外、液質(zhì)

2、以及核磁共振檢測后，采用戊二醛法分別與BSA和OVA偶聯(lián)。再利用活化酯法將五種喹諾酮藥物直接與BSA和OVA偶聯(lián)。經(jīng)紫外鑒定，半抗原與蛋白質(zhì)的偶聯(lián)均成功。分別免疫兔子，制備多克隆抗體，經(jīng)篩選，效價為102400的諾氟沙星衍生物的抗血清較好。 以此抗血清為基礎(chǔ)，初步建立了基于多克隆抗體的間接ELISA方法，來檢測QNs。并通過改變相關(guān)的物理、化學影響因素，例如：包括包被溶液、抗體稀釋液、封閉液、競爭時間、抗體與標準溶液的體積比等，

3、對ELISA方法進行優(yōu)化，進而在ELISA條件下獲得更好的結(jié)果。 優(yōu)化后，最終得到標準曲線，檢測限(IC90)為0.0126ng/mL、半數(shù)抑制量(IC50)為0.54ng/mL和檢測范圍(IC20～IC50)為0.04467～14ng/mL。此外，還從方法的特異性、準確性、靈敏度來評估了本ELISA方法?；厥章史謩e是63％～95％，變異系數(shù)小于20％。除與5種QNs的交叉反應低于5％外，其余13種QNs分別在16％和112％之