GnRH主動(dòng)免疫對(duì)雄性藏綿羊繁殖性能的影響.pdf

1、自20世紀(jì)60年代末，在免疫學(xué)、生物化學(xué)、內(nèi)分泌學(xué)等學(xué)科的基礎(chǔ)上，逐漸興起了一門邊緣學(xué)科——激素免疫學(xué)，為探討取代動(dòng)物傳統(tǒng)外科閹割的新方法提供了新的思路。用外源性GnRH主動(dòng)免疫動(dòng)物，刺激動(dòng)物機(jī)體產(chǎn)生大量抗GnRH特異性抗體，引起生殖內(nèi)分泌系統(tǒng)平衡的失調(diào)，改變下丘腦-垂體-性腺軸間的正常反饋調(diào)節(jié)關(guān)系，以減少生殖激素的合成和分泌及終止配子的發(fā)生，從而達(dá)到免疫去勢(shì)的目的。GnRH主動(dòng)免疫可避免外科閹割引起的動(dòng)物高度應(yīng)激、外科傷口容易感染，增

2、加動(dòng)物發(fā)病率甚至導(dǎo)致動(dòng)物死亡等諸多不足，已成為最有望替代外科閹割的安全友好方法。目前，國(guó)內(nèi)外一些學(xué)者已在該領(lǐng)域開(kāi)展了相關(guān)研究，但大多采用GnRH單體或并列體作為免疫原，效果不甚理想。本試驗(yàn)用蛋白結(jié)構(gòu)修飾后的GnRH并列體二聚物(G6k-GnRH-Tandem-Dimer)與卵清蛋白偶聯(lián)，以Specol為佐劑，主動(dòng)免疫雄性藏綿羊，以研究其對(duì)雄性藏綿羊繁殖性能的影響。
　　試驗(yàn)選取24周齡、體重17-19Kg的雄性藏綿羊35只，隨機(jī)分

3、為免疫去勢(shì)組、完整對(duì)照組和手術(shù)去勢(shì)組，其中免疫去勢(shì)組和完整對(duì)照組均為12只，手術(shù)去勢(shì)組11只。25周齡時(shí)免疫去勢(shì)組各只綿羊于頸部皮下注射2 mL GnRH并列體二聚物卵清蛋白復(fù)合物(TDK-OVA)的Specol乳化劑(含TDK100μg)，8周后加強(qiáng)免疫一次，注射劑量及方法同初次免疫。完整對(duì)照組不做任何處理，手術(shù)去勢(shì)組則在試驗(yàn)開(kāi)始前一周(24周齡)進(jìn)行外科手術(shù)去勢(shì)。初次免疫當(dāng)天記為0wpv。初免當(dāng)天及初免后第4、8、12、16 wpv

4、（即每4周1次，直至屠宰）頸靜脈采集血樣，酶聯(lián)免疫法(ELISA)測(cè)定血清抗體滴度及激素含量變化。加強(qiáng)免疫后8周(即16 wpv)，屠宰所有試驗(yàn)綿羊，分離垂體及兩側(cè)睪丸，記錄睪丸重量及睪丸體積。一側(cè)睪丸用于組織學(xué)分析，Real-Time quantitative PCR分析垂體及另一側(cè)睪丸生殖相關(guān)基因mRNA表達(dá)變化。結(jié)果顯示，免疫去勢(shì)組產(chǎn)生了良好的抗體反應(yīng)，初免后機(jī)體產(chǎn)生抗體，加免后血清抗GnRH抗體滴度快速升高，由加免當(dāng)天的30.2

5、5ng/mL升高到12周(12wpv)的最高峰（91.72ng/mL），后保持在較高水平，直至屠宰（80.59ng/mL）。與完整對(duì)照組相比，免疫去勢(shì)組血清T含量顯著下降(P＜0.05），屠宰時(shí)仍維持在較低水平（4.27ng/mL）。與完整對(duì)照組和手術(shù)去勢(shì)組相比，免疫去勢(shì)組血清LH和FSH顯著下降(P＜0.05），屠宰時(shí)仍維持在較低水平，分別為0.28ng/mL、0.32ng/mL。手術(shù)去勢(shì)組血清LH和FSH均顯著高于完整對(duì)照組(P＜0

6、.05)。與完整對(duì)照組相比，GnRH主動(dòng)免疫顯著下調(diào)綿羊垂體GnRH-R、LH-β、FSH-β及睪丸LH-R、FSH-RmRNA表達(dá)水平(P＜0.05)，而手術(shù)去勢(shì)組綿羊垂體GnRH-R、LH-β、FSH-β表達(dá)水平顯著高于免疫去勢(shì)組和完整對(duì)照組(P＜0.05)。屠宰時(shí)，完整對(duì)照組睪丸平均重量為51.71±7.58g，平均體積為49.04±6.66cm3;免疫去勢(shì)組睪丸平均重量為41.58±5.77g，平均體積為39.91±6.02cm

7、3。與完整對(duì)照組相比，免疫去勢(shì)組睪丸發(fā)生萎縮，其重量及體積均下降到對(duì)照組睪丸的80％(P＜0.05)。組織學(xué)分析發(fā)現(xiàn)，免疫去勢(shì)組綿羊睪丸曲細(xì)精管上皮組織嚴(yán)重受損，間質(zhì)細(xì)胞萎縮且數(shù)量明顯減少，精子發(fā)生停止，管內(nèi)僅有少數(shù)退化的精原細(xì)胞。
　　上述研究結(jié)果表明，GnRH主動(dòng)免疫能夠:(1)顯著降低血清T、LH和FSH濃度;(2)顯著下調(diào)垂體GnRH-R、LH-β、FSH-β及睪丸LH-R、FSH-R mRNA表達(dá)水平;(3)有效抑制雄性