青錢柳細胞懸浮體系的建立及其三萜類化合物的代謝調(diào)控.pdf

1、青錢柳(Cyclocarya paliurus(Batal.)Iljinskaja)是我國特有的珍稀單種屬植物，也是國家重點保護的瀕危植物之一。含有多種生物活性物質(zhì)，如三萜類等，但由于現(xiàn)有的青錢柳資源主要是天然林，不僅數(shù)量少，多零星分布于深山老林和一些自然保護區(qū)中，而且青錢柳在自然環(huán)境下生長緩慢，加上人工過度采集，導(dǎo)致其自然資源已瀕臨滅絕。研究利用細胞培養(yǎng)得到其有效成分是青錢柳資源開發(fā)利用的新途徑。
　　 本研究系統(tǒng)論述了青錢柳

2、細胞懸浮培養(yǎng)技術(shù)，通過多次繼代培養(yǎng)后取疏松的愈傷組織進行懸浮培養(yǎng)，優(yōu)化了培養(yǎng)條件并最終建立懸浮細胞系。同時探討了理化因子對懸浮細胞生長及總?cè)坪康挠绊?。主要研究結(jié)果如下：
　　 1、采用超聲波浸提法從青錢柳愈傷組織中提取總?cè)疲ㄟ^單因素實驗考察了不同提取劑、提取劑用量、超聲功率、提取溫度、提取時間對青錢柳三萜化合物提取的影響。并應(yīng)用正交實驗確定最佳工藝參數(shù)。結(jié)果表明，提取的最佳工藝為：以乙酸乙酯為提取溶劑，固液比1:10，超

3、聲功率60W，震蕩45min，提取次數(shù)1次。此時得率為2.45％。
　　 2、以青錢柳葉愈傷組織建立青錢柳細胞懸浮培養(yǎng)體系，測定了細胞懸浮培養(yǎng)的生長曲線，并研究了培養(yǎng)代數(shù)、接種量、裝液量、pn值和激素組合對青錢柳細胞懸浮體系建立的影響。結(jié)果表明：適合青錢柳懸浮培養(yǎng)的培養(yǎng)基為：MS+0.1 mg/L2，4-D+0.5mg/L NA.A+1 mg/L KT+40 g/L蔗糖，接種量為8％，搖瓶裝液量的體積分數(shù)為40％，初始pH值為5

4、.0。在一個培養(yǎng)周期內(nèi)，懸浮培養(yǎng)的青錢柳細胞的生長曲線呈“S”型，第10天干重和三萜總產(chǎn)量都達到了最高值，分別為18.70 g/L和1.25 g/L。
　　 3、研究了五種營養(yǎng)因子即碳源、氮源、肌醇、Ca2+和水解酪蛋白對青錢柳細胞生長及總?cè)菩纬傻挠绊憽?％的蔗糖是最合適的碳源；懸浮細胞在MS培養(yǎng)基下，氮源總量和比例不變時，青錢柳三萜的產(chǎn)量最高；肌醇對細胞生長和三萜產(chǎn)量的促進效果不大；鈣鹽和水解酪蛋白對細胞生長和總?cè)菩纬傻挠?/p>