牛分枝桿菌和卡介苗對(duì)樹(shù)突狀細(xì)胞及CD4+T細(xì)胞分化的影響.pdf

1、結(jié)核病防控是一個(gè)世界性難題，據(jù)統(tǒng)計(jì)全球三分之一的人都感染了結(jié)核分枝桿菌（Mycobacterium tuberculosis，M.tb），其中大部分屬于隱性感染，只有少部分發(fā)病，但是每年有約870萬(wàn)的新發(fā)病例。結(jié)核分枝桿菌能通過(guò)空氣傳播，并且能在環(huán)境中長(zhǎng)久存活。結(jié)核分枝桿菌是一種胞內(nèi)寄生菌，能夠感染樹(shù)突狀細(xì)胞和巨噬細(xì)胞等免疫遞呈細(xì)胞，并且能夠抑制免疫細(xì)胞對(duì)它的處理，在抗原遞呈細(xì)胞中存活，并且隨著抗原遞呈細(xì)胞的轉(zhuǎn)移而擴(kuò)散，導(dǎo)致持續(xù)感染，但

2、其免疫抑制和持續(xù)感染的分子機(jī)制不完全清楚。
　　 牛分枝桿菌(Mycobacterium bovis，M.bovis)與結(jié)核分枝桿菌基因同源性為99.95％，是牛結(jié)核病的主要病原菌。不僅能感染牛，同時(shí)能感染人和多種野生動(dòng)物。野生動(dòng)物成為帶菌者和散播者，使牛結(jié)核病的防控工作更加艱巨。牛分枝桿菌和結(jié)核分枝桿菌在體內(nèi)引起相似的致病過(guò)程。
　　 卡介苗(BCG)是牛分枝桿菌經(jīng)過(guò)體外傳代230代得到的弱毒菌，廣泛用于預(yù)防結(jié)核病，兒

3、童接種后能有效的產(chǎn)生免疫保護(hù)效應(yīng)。所以，研究強(qiáng)弱牛分枝桿菌菌株在機(jī)體內(nèi)的免疫反應(yīng)差異有助于闡明結(jié)核病的免疫抑制和持續(xù)感染的分子機(jī)制。
　　 樹(shù)突狀細(xì)胞（Dendritic cells，DCs）是體內(nèi)專職的抗原遞呈細(xì)胞，是聯(lián)接先天免疫和獲得性免疫的橋梁，同時(shí)也是結(jié)核分枝桿菌宿主細(xì)胞。本研究以樹(shù)突狀細(xì)胞為模式細(xì)胞，研究牛分枝桿菌和BCG感染誘導(dǎo)的差異反應(yīng)，及其對(duì)CD4+T分化的影響，以期為闡明結(jié)核病的免疫抑制和持續(xù)感染的分子機(jī)制提供

4、重要依據(jù)。取得如下研究結(jié)果:
　　 (1)牛分枝桿菌和BCG感染DCs后，BCG誘導(dǎo)產(chǎn)生了更高濃度的IL-12，TNF-α，RANTES和MCP-1;而牛分枝桿菌則誘導(dǎo)產(chǎn)生了更高濃度的IL-1β和IL-23。提示BCG感染誘導(dǎo)產(chǎn)生Th1型細(xì)胞因子和趨化因子，有利于產(chǎn)生更為有效的免疫保護(hù)反應(yīng);牛分枝桿菌則誘導(dǎo)更高水平的炎性細(xì)胞因子，反應(yīng)過(guò)度時(shí)將發(fā)生炎性損傷反應(yīng)。
　　 (2)滅活細(xì)菌與活細(xì)菌感染DCs后，活細(xì)菌誘導(dǎo)產(chǎn)生的細(xì)

5、胞因子與趨化因子都高于滅活細(xì)菌誘導(dǎo)產(chǎn)生的，說(shuō)明活細(xì)菌感染對(duì)有效誘導(dǎo)DCs反應(yīng)是必須的。
　　 (3) NF-κB抑制劑PDTC能夠抑制M.bovis和BCG感染DCs誘導(dǎo)的細(xì)胞因子表達(dá)，表明其受NF-κB轉(zhuǎn)錄因子的調(diào)控。
　　 (4)牛分枝桿菌和BCG感染DCs、無(wú)細(xì)胞培養(yǎng)液（含細(xì)胞因子）和感染后DCs細(xì)胞培養(yǎng)物（感染DCs+細(xì)胞因子）分別與幼稚型CD4+T細(xì)胞互作，檢測(cè)細(xì)胞因子以及流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞的分化情況，結(jié)果表明

6、:BCG感染的DCs能誘導(dǎo)T細(xì)胞產(chǎn)生較多的IFN-γ，而牛分枝桿菌誘導(dǎo)更多的IL-10和IL-17;細(xì)胞流式細(xì)胞儀檢測(cè)表明，牛分枝桿菌誘導(dǎo)更多的CD25+Foxp3+雙陽(yáng)性Treg細(xì)胞，而活細(xì)菌及滅活細(xì)菌都不能直接刺激CD4+T細(xì)胞的分化。以上結(jié)果提示:BCG傾向于誘導(dǎo)Th1型細(xì)胞的分化，而牛分枝桿菌傾向于誘導(dǎo)更多Th17和Treg型細(xì)胞的分化。Th1型細(xì)胞將產(chǎn)生免疫保護(hù)反應(yīng)，而Th17和Treg型細(xì)胞則與炎性反應(yīng)和免疫抑制有關(guān)。這些結(jié)