卡介苗對(duì)哮喘兒童樹(shù)突狀細(xì)胞作用的研究.pdf

1、目的：
　　 通過(guò)觀察卡介苗(BCG)對(duì)哮喘兒童外周血單個(gè)核細(xì)胞(peripheral blood mononuclear cells，PBMCs)來(lái)源的樹(shù)突狀細(xì)胞(Dendritic cell，DC)的表面標(biāo)志、刺激淋巴細(xì)胞增殖功能及分泌細(xì)胞因子的影響，并與變應(yīng)原特異性免疫治療(ASIT)作比較，分析BCG對(duì)哮喘患兒PBMC來(lái)源的DC成熟及免疫功能的影響。
　　 方法：
　　 采集哮喘急性發(fā)作期患兒靜脈血，隨機(jī)

2、分為BCG干預(yù)組和哮喘組，并采集ASIT治療后的哮喘患兒和正常兒童的靜脈血作為ASIT對(duì)照組和正常對(duì)照組，分離出外周血單個(gè)核細(xì)胞(PBMCs)，貼壁培養(yǎng)獲得外周血單核細(xì)胞(peripheral blood monocytes，PB-Mon)，rhGM-CSF、rhIL-4聯(lián)合誘導(dǎo)單核細(xì)胞分化生成未成熟樹(shù)突狀細(xì)胞，培養(yǎng)第6天開(kāi)始加入TNF-α誘導(dǎo)成熟，BCG干預(yù)組在培養(yǎng)的第7天加入BCG刺激，在倒置顯微鏡下連續(xù)觀察DC的形態(tài)學(xué)變化，通過(guò)收

3、集培養(yǎng)第9天DCs，流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)DCs表面標(biāo)志物HLA-DR、CD80、CD83、CD86及CD1a的表達(dá)率，MTT法檢測(cè)DCs刺激同種異體淋巴細(xì)胞增殖的能力，ELISA法測(cè)定DC培養(yǎng)上清中IL-10、IL-12的分泌水平，分析BCG在體外對(duì)哮喘患兒外周血單個(gè)核細(xì)胞來(lái)源的DC成熟程度及免疫功能的影響。
　　 結(jié)果：
　　 (1)PBMCs貼壁培養(yǎng)獲得的外周血單核細(xì)胞在rhGM-CSF、rhlL-4、rhTNF-α協(xié)同誘

4、導(dǎo)作用下，分化成為形態(tài)上具有典型樹(shù)突狀突起的DCs；(2)正常對(duì)照組、BCG干預(yù)組和ASIT對(duì)照組DCs表達(dá)CD80、CD83水平均高于哮喘組(P均＜0.05)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，而正常對(duì)照組、BCG干預(yù)組、ASIT對(duì)照組之間兩兩比較，CD80、CD83表達(dá)水平差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)；CD1a、HLA-DR和CD86的表達(dá)水平四組之間差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均＞0.05)；(3)正常對(duì)照組、BCG干預(yù)組和ASIT對(duì)照組DCs分泌

5、IL-12水平均高于哮喘組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均＜0.05)，正常對(duì)照組IL-12水平高于BCG干預(yù)組和ASIT對(duì)照組(P＜0.05)，而B(niǎo)CG干預(yù)組和ASIT對(duì)照組的差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)；哮喘組、BCG干預(yù)組和ASIT對(duì)照組DCs分泌IL-10水平均高于正常對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均＜0.05)，ASIT對(duì)照組低于哮喘組和BCG干預(yù)組(P＜0.05)，而哮喘組與BCG干預(yù)組比較差別無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)；(4)

6、BCG干預(yù)組、哮喘組及ASIT對(duì)照組DC刺激同種異體淋巴細(xì)胞增殖增殖倍數(shù)高于正常對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，而B(niǎo)CG干預(yù)組、哮喘組、ASIT對(duì)照組兩兩比較的差別無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。
　　 結(jié)論：
　　 1、BCG可影響哮喘患兒PBMC來(lái)源DCs的成熟狀態(tài)。
　　 2、BCG可提高哮喘患兒PBMC來(lái)源的DCs表面CD80表達(dá)，上調(diào)IL-12分泌水平，促進(jìn)Th0細(xì)胞向Th1細(xì)胞分化，從而調(diào)節(jié)T