囊素樣肽結構與功能的構效研究.pdf

1、囊素是從雞法氏囊中提取出來的第一個多肽物質，在機體抗體的生成和維持方面都有重要作用。國內外研究已經(jīng)證明囊素可提高體液免疫反應，加強細胞免疫水平。但是囊素在體內的代謝機制還不清楚，目前臨床應用效果也不盡如意，為進一步闡明囊素的調節(jié)作用和免疫機制，本研究以囊素三肽為基礎，化學合成了單拷貝囊素(BS)、30拷貝囊素串聯(lián)(KG30)和30拷貝分支結構囊素(MAP)等三種不同結構的囊素樣肽，進行了囊素樣肽結構與功能的構效研究，以探究結構對生物功能

2、的影響，為進一步研究和臨床應用奠定基礎。
　　 1.囊素樣肽對淋巴細胞增殖的影響為研究不同結構的囊素樣肽的免疫活性，提取雞的外周血淋巴細胞，用MTT法檢測淋巴細胞的增殖率。結果表明，三種不同結構的囊素樣肽中BS的免疫刺激活性高于KG30和MAP，增殖率可達到49.2％，其次為MAP，三種結構的囊素之間差異顯著(P＜0.05)。
　　 2.囊素樣肽對雜交瘤細胞抗體分泌的影響用ELISA法比較不同結構的囊素樣肽對乙腦雜交瘤細

3、胞抗體分泌的影響情況，設置單拷貝(BS)組、30拷貝串聯(lián)(KG30)組、30拷貝分支結構(MAP)組和對照組，同時設陰性和陽性對照。結果顯示在50μg/mL的作用濃度下，MAP組值與細胞對照組相比增加了14.83％，BS組增加了9.57％，KG30增加了4.97％，表明不同結構的囊素對雜交瘤細胞都能起到促進其抗體分泌的作用，作用效果最好的是MAP。
　　 3.囊素樣肽對T淋巴細胞玫瑰花環(huán)形成的影響實驗設計對照組、單拷貝(BS)組

4、、30拷貝串聯(lián)(KG30)組和30拷貝分支結構(MAP)組，分離雞的淋巴細胞后處理成脫E受體的淋巴細胞(Ea)，加入綿羊紅細胞處理后染色，觀察并計算玫瑰花環(huán)活性花環(huán)率。結果，BS及MAP組處理的雞外周血淋巴細胞玫瑰花環(huán)活性花環(huán)率高于KG30，與對照組相比，其Ea-花環(huán)率分別提高了39.2％和29.2％，刺激活性作用差異顯著(P＜0.05)，但兩組之間相比差異不顯著(P＞0.05)。KG30的作用與對照組相比無差異性。表明BS和MAP結構

5、的囊素可有效提高花環(huán)率的形成，可提高機體的細胞免疫水平，并以BS的刺激活性為最佳。
　　 4.囊素樣肽對吞噬細胞的影響先通過注射淀粉物質誘導巨噬細胞到達腹腔，然后將化學合成的不同結構的囊素樣肽腹腔注射到小鼠體內，最后腹腔注射1％雞紅細胞，收集腹腔液，吉姆薩染色并觀察計算吞噬率和吞噬指數(shù)，以探究其對小鼠的腹腔巨噬細胞吞噬功能的影響。結果表明，三種不同結構的囊素樣肽均可顯著提高巨噬細胞的吞噬率和吞噬指數(shù)，與對照組相比，BS組、和MA

6、P組可以使吞噬率分別提高32.48％和5.78％，吞噬指數(shù)為65.8％和57.72％，以BS刺激活性最佳，實驗組與對照組相比差異顯著(P＜0.05)，實驗組之間差異亦顯著(P＜0.05)。表明不同結構的囊素均能增強小鼠腹腔巨噬細胞的吞噬活性，可提高免疫水平。
　　 5.囊素樣肽對新城疫滅活苗免疫效果的影響將100只1日齡NDV非免的海蘭褐雛雞隨機分成空白對照組、疫苗對照組、囊素組（BS組）、30拷貝串聯(lián)組（KG30組）和30拷貝

7、分支組(MAP)。皮下注射新城疫滅活疫苗（Lostar株）0.2mL，用微量血凝-血凝抑制方法檢測各組雞的血清抗體效價、法氏囊指數(shù)、脾臟指數(shù)和血清中IL-2、IL-4的含量。結果表明，不同結構的囊素樣肽與空白對照組和疫苗對照組相比均能顯著提高雞的法氏囊指數(shù)(P＜0.05)和抗體水平，MAP組和BS組之間差異不顯著，但以MAP組效果最佳;MAP組可以顯著增加IL-4分泌。表明在體內試驗中MAP組即分支結構的囊素可顯著提高法氏囊指數(shù)，有效促