基于牡蠣糖原硫酸酯結(jié)構(gòu)的多糖構(gòu)效關(guān)系研究.pdf

1、天然多糖具有多種生物活性，包括提高免疫力、抗氧化、抗腫瘤、抗病毒、抗凝血等。經(jīng)過(guò)研究發(fā)現(xiàn)許多具備某種特定生理活性的天然多糖，都具有著一定特殊的分子結(jié)構(gòu)。這種特定的分子結(jié)構(gòu)決定著其所具備的生物活性能力。但至今對(duì)多糖的結(jié)構(gòu)與活性所對(duì)應(yīng)關(guān)系（多糖構(gòu)效關(guān)系）的研究仍然進(jìn)展緩慢，其主要障礙之一就是缺乏能夠作為多糖構(gòu)效關(guān)系研究的模式化合物，這種多聚化合物必須具備單一的可比較的單糖組成、明確且簡(jiǎn)潔的單糖鏈接糖苷鍵型、一致的異頭物構(gòu)型、明確的且取代位置

2、相同的取代基、可有效掌控的分子量大小。找到符合上述條件的模式多糖成為多糖構(gòu)效關(guān)系研究中的無(wú)法回避的難點(diǎn)之一。天然多糖結(jié)構(gòu)復(fù)雜，組成單糖復(fù)雜，連接鍵型多種多樣，取代基種類及取代位置變化多端，不同分子量但具有相同結(jié)構(gòu)的多糖難以獲取等等，這一系列的難題使得將某種多糖具備的生理活性與其結(jié)構(gòu)精確對(duì)應(yīng)成為一件難以完成的任務(wù)。
　　 本研究從大連灣牡蠣，學(xué)名OstreatalienwhanensisCrosse體內(nèi)提取出一種多糖物質(zhì)，經(jīng)過(guò)分離

3、純化以及結(jié)構(gòu)鑒定后得到一種純度良好的糖原物質(zhì)，此糖原經(jīng)過(guò)硫酸化修飾后得到了一種硫酸取代基專一取代在C-6位置的硫酸化糖原。此種糖原具有簡(jiǎn)單的單糖組成和異頭物構(gòu)型、一致的糖苷鍵鍵型、可控的分子長(zhǎng)短、一致且位置確定的硫酸基取代，成為極其優(yōu)良的可以做為多糖構(gòu)效關(guān)系研究的模型化合物。
　　 1、為獲取純度良好的牡蠣糖原，本研究采用多糖含量為評(píng)價(jià)指標(biāo)優(yōu)化了牡蠣糖原提取方法，盡可能的去除糖原所共價(jià)連接的蛋白成分。最優(yōu)提取條件為:以胃蛋白酶酶

4、解提取，料液比1∶45，加酶量為底物質(zhì)量的1.5％，pH2.0，溫度37℃，酶解時(shí)間2h。酶解提取物再經(jīng)過(guò)乙醇醇沉沉淀、DEAE-52陰離子纖維素柱和SephadexG-100凝膠柱洗脫分離純化出一種純度良好的牡蠣多糖聚合物。
　　 2、對(duì)所提取到的多糖物質(zhì)進(jìn)行了結(jié)構(gòu)解析。樣品通過(guò)衍生化經(jīng)氣相色譜和液相色譜方法分別鑒定證明其只含有葡萄糖組成成分，IR掃描結(jié)果證明其為多糖類結(jié)構(gòu)物質(zhì)。樣品甲基化后經(jīng)GC-MS分析發(fā)現(xiàn)此提取物具有1-

5、4Glc，1-4，6Glc和1-Glc的鏈接鍵型結(jié)構(gòu)，屬于典型的糖原特征組成鍵型，并且還存在有痕量的其他葡萄糖組成鍵型。且1-4，6Glc與1-4Glc鍵型在數(shù)量上的比例約為1∶6.6，說(shuō)明此糖原結(jié)構(gòu)平均每6.6個(gè)葡萄糖存在一次分支。核磁共振譜分析同樣證明了此提取物的糖原組成結(jié)構(gòu)。從而證實(shí)了該牡蠣提取物為牡蠣糖原，且其分支率較高，平均每6.6個(gè)葡萄糖殘基中發(fā)生一次分支。
　　 3、對(duì)此牡蠣糖原進(jìn)行硫酸化修飾后，經(jīng)過(guò)分離純化得到3

6、個(gè)組分，分別對(duì)其進(jìn)行分子結(jié)構(gòu)鑒定，發(fā)現(xiàn)其中組分SOG的結(jié)構(gòu)為硫酸基特異性取代于單糖殘基的C-6羥基位置的硫酸化牡蠣糖原.而組分SOGI的結(jié)構(gòu)為硫酸基取代在糖殘基的C-2和C-3羥基位置的硫酸化牡蠣糖原。對(duì)此兩種糖原進(jìn)行體外促淋巴細(xì)胞增殖能力的研究發(fā)現(xiàn)SOG的活性要明顯強(qiáng)于SOGI，而其分子結(jié)構(gòu)除硫酸基取代位置因素不同外其他因素基本一致，這證明在多糖的構(gòu)效關(guān)系中，硫酸基取代位點(diǎn)對(duì)于其促淋巴細(xì)胞增殖能力有著重要影響，且硫酸基在C-6位置取代

7、的結(jié)構(gòu)其活性最佳。
　　 4、通過(guò)對(duì)硫酸化牡蠣糖原SOG進(jìn)行高碘酸氧化降解，得到了一個(gè)硫酸基含量達(dá)到40.6％，分子量為6.3×106的組分SOGFI。將SOGF1與硫酸化修飾后得到的另外3種硫酸酯糖原SOG、SOGl和SOG2編成一研究對(duì)照組，構(gòu)成了一組具有不同硫酸基含量、不同分子質(zhì)量但結(jié)構(gòu)相似的硫酸酯糖原組，對(duì)其進(jìn)行活性研究表明:此4種硫酸酯糖原均有促淋巴細(xì)胞增殖活性，其能力大小關(guān)系為SOG＞SOGFI＞SOGl＞SOG2。

8、對(duì)照他們的結(jié)構(gòu)與活性之間關(guān)系分析發(fā)現(xiàn)，多糖結(jié)構(gòu)對(duì)促淋巴細(xì)胞增殖活性影響因素的強(qiáng)弱順序?yàn)?多糖結(jié)構(gòu)中硫酸基取代位點(diǎn)＞多糖中硫酸基含量＞硫酸基多糖分子量。
　　 總之，此多個(gè)多糖組分經(jīng)過(guò)結(jié)構(gòu)對(duì)應(yīng)的活性測(cè)試可以總結(jié)出，多糖中硫酸基的含量與活性間有著線性的平行對(duì)應(yīng)規(guī)律，但分子量大小因素并沒有非常明確的影響規(guī)律。在其他結(jié)構(gòu)因素相同的情況下，C-6位置硫酸基取代對(duì)多糖活性的提升具有決定性影響，其次，硫酸酯多糖的活性受結(jié)構(gòu)中硫酸基含量的影響，