小黃魚ACE抑制肽的分離純化鑒定及構(gòu)效關(guān)系研究.pdf

1、本文以小黃魚魚肉為原料，酶解法制取ACE抑制粗肽，然后經(jīng)過多步分離純化鑒定小黃魚ACE抑制肽，同時對ACE抑制五肽進(jìn)行了構(gòu)效關(guān)系的研究，篩選得到新型ACE抑制肽，并研究其在細(xì)胞層面上的降壓機(jī)理，以期為ACE抑制肽的研究開發(fā)提供理論依據(jù)。
　　小黃魚魚肉用胰蛋白酶酶解，經(jīng)過響應(yīng)曲面(RSM)優(yōu)化，用RP-HPLC法測定得其體外ACE抑制活性，確定最優(yōu)工藝條件為:pH7.0，溫度50.09℃，時間16.44h，底物濃度5.57％，酶底

2、比9.12‰。獲得的小黃魚ACE抑制多肽ACE抑制率達(dá)87.78％。
　　以最佳酶解工藝條件下制得的小黃魚ACE粗肽為原料，進(jìn)行多步分離純化，純化步驟依次為:超濾(截留分子量3000Da)、SephadexG25分子篩層析和SephadexG10層析，并用LC-TOFMS鑒定活性最高組分，人工合成后測定其體外ACE抑制活性。結(jié)果為:分子量小于3000Da的肽具有高ACE抑制活性，抑制率達(dá)98.1％，分離純化得到的組分3-3抑制率為

3、69.49％，液質(zhì)鑒定得到兩個五肽，分別為HDHSE（IC50值=38.741μmol/L）和GENSQ(IC50值=65.377μmol/L)。
　　本研究收集文獻(xiàn)報(bào)道的63個ACE抑制五肽，用偏最小二乘回歸法建立起構(gòu)效關(guān)系(QSAR)模型，用留一法進(jìn)行內(nèi)部驗(yàn)證，小黃魚ACE抑制肽進(jìn)行外部驗(yàn)證，并篩選出一種未報(bào)到的新型ACE抑制肽。結(jié)果如下:模型的交叉驗(yàn)證相關(guān)系數(shù)Rev2為0.5752，且小黃魚ACE抑制肽活性的預(yù)測值和實(shí)驗(yàn)值相

4、差不大，有此可知，建立模型具有較強(qiáng)的預(yù)測能力。分析QSAR模型得出，ACE抑制五肽C-端起第一位氨基酸的電性參數(shù)和第二位氨基酸殘基疏水性指數(shù)對ACE抑制活性的影響起主要作用（正相關(guān)）。此外，運(yùn)用模型預(yù)測出一種未見報(bào)道的新型ACE抑制肽——IWHDC，人工合成后測得其IC50值為19.179μmol/L。
　　以QSAR模型篩選出的新型ACE抑制肽——IWHDC為原料，研究其對人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞的影響，測定了不同濃度肽對細(xì)胞增殖的影響