番茄轉(zhuǎn)錄因子SlMYB12介導(dǎo)的類黃酮合成過程中的功能研究以及水稻抗病相關(guān)基因OsDRxoc5的功能分析.pdf

1、本研究包括兩部分相對(duì)獨(dú)立的內(nèi)容。
　　 類黃酮是一類天然的植物次生代謝產(chǎn)物，具有抗氧化和抗病毒病等重要功能，目前廣泛種植的番茄僅含有少量的類黃酮。本研究通過利用番茄果實(shí)特異性表達(dá)啟動(dòng)子E8，轉(zhuǎn)化番茄內(nèi)源類黃酮調(diào)控基因SlMYB12，獲得一系列富含類黃酮（蘆丁、山奈酚蕓香苷和柚皮素查爾酮）和咖啡?？崴岬姆艳D(zhuǎn)基因株系，驗(yàn)證了番茄內(nèi)源SlMYB12基因能如擬南芥AtMYB12 一樣具有調(diào)節(jié)類黃酮合成的功能。
　　 研究中采

2、用pX6-GFP 載體、高保真PCR 技術(shù)，通過分步克隆策略，構(gòu)建了植物表達(dá)載體pX6-E8::SlMYB12，并導(dǎo)入農(nóng)桿菌工程菌株AGL1。通過葉盤法轉(zhuǎn)化番茄品種Micro-Tom、CSl09-03、圣女果，分別獲得PCR 陽性轉(zhuǎn)基因植株15 株、20 株和31 株。
　　 利用HPLC對(duì)轉(zhuǎn)基因株系進(jìn)行了類黃酮和咖啡?？崴岷繖z測(cè)，三個(gè)轉(zhuǎn)基因材料都有明顯的提高。其中，Micro-Tom 背景下株系CD07T-2和CD07T-

3、7 果皮蘆丁含量達(dá)到15.66和12.99 mg﹒g-1 DW，與對(duì)照相比提高了12-14倍；咖啡?？崴嶂饕嬖谟诠猓岣咭埠苊黠@。CSl09-03 背景下，株系CD08T-8 果皮蘆丁達(dá)到7.94 mg﹒g-1 DW，提高了36.8倍；株系CD08T-13 咖啡?？崴崽岣吡?8.7倍；山奈酚蕓香苷平均提高了2-3倍。圣女果背景下，株系CD09-7、CD09-15、CD09-20、CD09-33 果皮蘆丁提高了24.4-33.6倍

4、，CD09-30和CD09-7 果皮山奈酚蕓香苷分別達(dá)到1.16和7.20 mg﹒g-1DW；CD09-20和CD09-33 果實(shí)咖啡?？崴徇_(dá)到1.50和2.25 mg﹒g-1 DW，總體類黃酮和咖啡?？崴崽岣唢@著。
　　 該研究結(jié)果為后續(xù)以栽培型小果番茄作為生物反應(yīng)器生產(chǎn)類黃酮生物制品，得到具有食用安全性的番茄新品種，進(jìn)行品種培育和產(chǎn)業(yè)化加工奠定基礎(chǔ)。
　　 另一方面，水稻細(xì)菌性條斑病平均每年造成水稻減產(chǎn)10％-2

5、0％，目前還沒有有效的防治方法。本研究利用高保真PCR 技術(shù)，對(duì)一個(gè)病原誘導(dǎo)表達(dá)基因OsDRxoc5（編碼熱激蛋白）進(jìn)行分離克隆，轉(zhuǎn)化粳稻材料牡丹江8號(hào)和圣稻806 并進(jìn)行基因功能驗(yàn)證，探索基因OsDRxoc5 在細(xì)條病互作中的功能。
　　 研究利用超量表達(dá)和雙鏈RNAi 抑制技術(shù)，構(gòu)建了超量表達(dá)載體pU1301-OsDRxoc5和抑制表達(dá)載體ds1301-OsDRxoc5，導(dǎo)入農(nóng)桿菌工程菌株EHA105。采用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法將上述