不同菌源誘導免疫的黃粉蟲抗菌肽抑菌活性及其Tricine-SDS-PAGE分析.pdf

1、本論文以饑餓處理后的黃粉蟲(Tenebrio molitor)幼蟲為試驗材料,通過飼4株細菌、針刺后飼10株真菌、1株放線菌誘導免疫,經(jīng)研磨、加熱、冷凍離心法獲得抗菌肽提取物,采用抑菌圈法測定其對24種植物病原真菌和2種動物病原細菌抑菌活性,利用三等分法劃分四種類型評價抑菌活性及抑菌譜；計算抑菌活性前3位處理的頻次；用Tricine-SDS-PAGE法分離純化、Gel-Pro analyzer軟件分析不同菌源誘導免疫所產(chǎn)生的抗菌肽差異,

2、測定主要活性成分的分子量。結果如下:
　　 1、不同菌源誘導免疫的黃粉蟲抗菌肽抑菌活性上存在明顯差異
　　 不同菌源誘導免疫的黃粉蟲抗菌肽抑菌活性較好的有番茄灰霉病病菌、黃瓜灰霉病病菌、白菜黑斑病病菌、辣椒根腐病病菌等,其中采用球孢白僵菌(家蠶)誘導后的提取物對番茄灰霉病病菌最大抑菌活性直徑達到6.23mm,而采用淺灰鏈霉菌誘導后的提取物對小麥根腐病病菌最大抑菌活性直徑達到0.94mm。對番茄灰霉病病菌、甘薯軟腐病病菌的

3、高活性、中活性區(qū)處理數(shù)之和最高(32個),各占總處理數(shù)(60)的53％,而對甘薯黑斑病病菌高活性、中活性區(qū)處理數(shù)之和最低(2個),占總處理數(shù)的3％；對甜瓜炭疽病病菌無活性處理數(shù)最高(44個),占總處理數(shù)73％,而對金黃色葡萄球菌無活性處理數(shù)最低(4個),占總處理數(shù)7％。
　　 2、黃粉蟲抗菌肽誘導處理間在抑菌譜方面存在明顯差異
　　 與對照組相比,經(jīng)枯草芽孢桿菌、Bt、金黃色葡萄球菌、大腸桿菌誘導第1、2、3天誘導處理在

4、高活性、中活性、低活性區(qū)抑菌水平抑菌譜數(shù)目增加,無活性抑菌譜數(shù)目明顯減少,其中枯草芽孢桿菌誘導抑菌活性最為明顯；經(jīng)蟲生真菌及生防放線菌淺灰鏈霉菌誘導處理絕大部分抑菌譜數(shù)在高活性區(qū)明顯增加,中活性區(qū)增加,無活性區(qū)明顯減少,而經(jīng)普通真菌干酵母誘導處理基本維持在對照水平上。值得注意的是抗菌譜種類不盡相同。
　　 3、黃粉蟲抗菌肽抑菌活性前3位誘導處理頻次上存在明顯差異
　　 頻次順序依次為生防細菌、蟲生真菌、殺蟲放線菌及動物病

5、原細菌等,其中枯草芽孢桿菌誘導處理出現(xiàn)頻次最高,達到11.5,球孢白僵菌(家蠶)、Bt、CK(水)誘導處理出現(xiàn)頻次最低,達到2.6,最高頻次是最低頻次的4.4倍左右。生防微生物可以更好地誘導昆蟲抗菌肽的表達。
　　 4、不同菌源誘導免疫的黃粉蟲抗菌肽種類有一定差異
　　 不同菌源誘導免疫的黃粉蟲抗菌肽種類不完全相同,同一菌源誘導免疫的黃粉蟲抗菌肽種類、數(shù)量隨提取時間也存在一定差異。獲得了4.2kD、5.2kD、6.6kD

6、、6.9kD、11.0kD、12.6kD、13.2kD、14.7kD、17.8kD、18.7kD、23.6kD、24.4kD、25.1kD、25.3kD、25.8kD、26.0kD、27.6kD、28.5kD(已報道的在4.5kD左右)等一系列多肽條帶(電泳純)。例如對番茄灰霉病病菌效果好的球孢白僵菌(家蠶)誘導后第2天提取的黃粉蟲抗菌肽表達了5.2kD、6.6kD、11.0kD、18.7kD等多肽。
　　 5、選擇適宜的誘導方