基于未成熟合子胚的杉木胚性組織誘導(dǎo)和繼代的研究.pdf

1、本試驗(yàn)以不同發(fā)育階段、不同基因型的未成熟杉木合子胚為外植體,研究了培養(yǎng)基、生長(zhǎng)素、分裂素、脫落酸及油菜素內(nèi)酯(BL)對(duì)杉木胚性組織誘導(dǎo)的影響,也探討了不同濃度組合的ABA和PEG4000對(duì)杉木體胚成熟的作用。通過本次試驗(yàn),確定了適合誘導(dǎo)杉木胚性組織的未成熟合子胚的發(fā)育階段、基因型。并針對(duì)不同的基因型,篩選出了胚性組織誘導(dǎo)率高的最優(yōu)化配方,解決了杉木胚性組織誘導(dǎo)率低的問題,為建立一個(gè)高效的杉木體胚再生系統(tǒng)奠定了基礎(chǔ)。本試驗(yàn)主要研究結(jié)果如下

2、:
　　 1.不同發(fā)育階段的未成熟合子胚對(duì)杉木胚性組織的誘導(dǎo)有重要影響。其中受精和原胚階段的未成熟合子胚最適合用來誘導(dǎo)杉木胚性組織,裂生多胚和優(yōu)勢(shì)胚階段次之。由于較低的誘導(dǎo)率,胚器官分化及成熟期階段的未成熟合子胚已不宜作為誘導(dǎo)杉木胚性組織的外植體。
　　 2.在未成熟合子胚的不同發(fā)育階段,基因型對(duì)杉木胚性組織誘導(dǎo)的影響均達(dá)到了顯著水平。在杉木胚胎發(fā)育的受精階段,6個(gè)基因型杉木球果的平均誘導(dǎo)率依次為:己2(15.20％)、

3、洋21(11.38％)、丁79(10.40％)、丁34(6.9％)、洋38(6.04％)洋18(3.89％)。在杉木胚胎發(fā)育的原胚階段,6個(gè)基因型杉木球果的平均誘導(dǎo)率依此為:己2(11.37％)、丁79(8.18％)、洋38(8.09％)、丁34(5.80％)、洋21(4.47％)、洋18(3.17％)。在杉木胚胎發(fā)育的裂生多胚階段,6個(gè)基因型杉木球果的平均誘導(dǎo)率依此為:己2(4.02％)、丁79(3.44％)、丁34(2.63％)、洋

4、21(2.47％)、洋18(1.29％)、洋38(1.17％)。在杉木胚胎發(fā)育的優(yōu)勢(shì)胚階段,6個(gè)基因型杉木球果的平均誘導(dǎo)率依此為:己2(1.63％)、丁79(1.40％)、洋21(1.31％)、丁34(1.05％)、洋38(0.92％)、洋18(0.88％)。
　　 3.培養(yǎng)基和激素組合對(duì)杉木胚性組織的誘導(dǎo)也有重要影響,針對(duì)不同基因型,篩選出了誘導(dǎo)杉木胚性組織的最優(yōu)化配方,結(jié)果如下:
　　 (1)丁34在合子胚不同發(fā)育階

5、段的最優(yōu)化配方分別是:受精和原胚階段均為DCR培養(yǎng)基+NAA(1.0mg／L)+6BA(0.5mg／L)+KT(0.5mg／L)+ABA(0.5mg／L)+BL(0.05mg／L)。裂生多胚階段為DCR培養(yǎng)基+NAA(2.0mg／L)+6BA(0.5mg／L)+KT(0.5mg／L)+ABA(1.0mg／L)+BL(0.025mg／L)。優(yōu)勢(shì)胚階段為:DCR培養(yǎng)基+NAA(0.5mg／L)+6BA(0.5mg／L)+KT(0.5mg／L

6、)+ABA(1.0mg／L)+BL(0.05mg／L)。
　　 (2)丁79在合子胚不同發(fā)育階段的最優(yōu)化配方分別是:受精和原胚階段均為L(zhǎng)P培養(yǎng)基+NAA(1.0mg／L)+6BA(0.5mg/L)+KT(0.5mg／L)+ABA(0.5mg／L)+BL(0.05mg／L)。裂生多胚階段為DCR培養(yǎng)基+NAA(2.0mg／L)+6BA(0.5mg／L)+KT(0.5mg／L)+ABA(0.5mg／L)+BL(0.05mg／L)。優(yōu)

7、勢(shì)胚階段為L(zhǎng)P培養(yǎng)基+NAA(0.5mg／L)+6BA(0.5mg／L)+KT(0.5mg／L)+ABA(1.0mg／L)+BL(0.05mg／L)。
　　 (3)己2在合子胚不同發(fā)育階段的最優(yōu)化配方分別是:受精和原胚階段均為DCR培養(yǎng)基+NAA(0.5mg／L)+6BA(0.5mg／L)+KT(0.5mg／L)+ABA(0.5mg／L)+BL(0.025mg／L)。裂生多胚和優(yōu)勢(shì)胚階段為DCR培養(yǎng)基+NAA(1.0mg／L)+

8、KT(0.5mg／L)+ABA(0.5mg／L)+BL(0.05mg／L)。
　　 (4)洋18在合子胚不同發(fā)育階段的最優(yōu)化配方分別是:受精和原胚階段均為L(zhǎng)P培養(yǎng)基+NAA(1.0mg／L)+6BA(0.5mg／L)+KT(0.5mg／L)+ABA(1.0mg／L)+BL(0.05mg／L)。裂生多胚階段為DCR培養(yǎng)基+NAA(1.0mg／L)+KT(0.5mg／L)+ABA(0.5mg／L)+BL(0.05mg／L)。優(yōu)勢(shì)胚階

9、段為DCR+NAA(0.5mg／L)+6BA(0.5mg／L)+KT(0.5mg／L)+ABA(1.0mg／L)+BL(0.025mg／L)。
　　 (5)洋21在合子胚不同發(fā)育階段的最優(yōu)化配方分別是:受精和原胚階段均為L(zhǎng)P培養(yǎng)基+NAA(0.5mg／L)+6BA(0.5mg／L)+KT(0.5mg／L)+ABA(1.0mg／L)+BL(0.025mg／L)。裂生多胚階段為:DCR培養(yǎng)基+NAA(1.0mg／L)+6BA(0.5

10、mg／L)+KT(0.5mg／L)+ABA(0.5mg／L)+BL(0.05mg／L)。優(yōu)勢(shì)胚階段為L(zhǎng)P培養(yǎng)基+NAA(2.0mg／L)+KT(0.5mg／L)+ABA(1.0mg／L)+BL(0.025mg／L)。
　　 (6)洋38在合子胚不同發(fā)育階段的最優(yōu)化配方分別是:受精階段為L(zhǎng)P培養(yǎng)基+NAA(0.5mg／L)+6BA(0.5mg／L)+KT(0.5mg／L)+ABA(1.0mg／L)+BL(0.025mg／L)。原胚

11、階段為L(zhǎng)P培養(yǎng)基+NAA(0.5mg／L)+6BA(0.5mg／L)+KT(0.5mg／L)+ABA(1.0mg／L)+BL(0.025mg／L)。裂生多胚階段為L(zhǎng)P培養(yǎng)基+NAA(2.0mg／L)+6BA(1.0mg／L)+ABA(0.5mg／L)+BL(0.05mg／L)。優(yōu)勢(shì)胚階段為DCR培養(yǎng)基+NAA(0.5rag／L)+6BA(0.5mg／L)+KT(0.5mg／L)+ABA(1.0mg／L)+BL(0.05mg／L)。