TaATG8在小麥受葉銹菌侵染誘發(fā)的過敏性反應(yīng)中的作用.pdf

1、過敏性反應(yīng)(Hypersensitive reaction，HR)，即病原菌侵染部位及附近的細胞快速死亡，形成枯斑(Necrotic lesion)，使病原菌得不到合適的生長環(huán)境和營養(yǎng)而死亡，這樣病害就被局限于某個范圍而不能擴展。同時，HR必須通過專門的機制被精細的控制在一定范圍，從而使寄主的損傷控制到最小。但這一調(diào)控機制至今尚不清楚。關(guān)于自噬在HR中的作用目前存在兩種截然相反的觀點:細胞自噬保護細胞免于死亡和細胞自噬促進細胞的死亡。目

2、前的資料表明這兩種假說都有可能正確，這主要取決于細胞的類型、刺激的種類和細胞的發(fā)育狀態(tài)。本課題組長期從事小麥抗葉銹菌侵染機制的研究，小麥在抵抗葉銹菌侵染時也會產(chǎn)生大量HR，課題組圍繞HR的誘發(fā)機制已經(jīng)做了大量工作，但對HR的限制機制卻知之甚少。本研究以小麥-葉銹菌互作體系為研究對象，利用小麥(Triticum aestivum L.)品種洛夫林10和葉銹菌(Puccinia triticina)生理小種260、165分別組成不親和組合和

3、親和組合，探討自噬在小麥抵抗葉銹菌侵染而誘發(fā)的HR中的作用。
　　 1.利用RT-PCR技術(shù)從小麥幼苗葉片中克隆獲得了自噬形成過程中的標志性基因TaATG8的全長。
　　 2.構(gòu)建了原核表達載體，獲得大量ATG8融合表達蛋白，通過免疫新西蘭兔，獲得高效價的兔抗血清，并證明該血清與ATG8融合蛋白呈特異結(jié)合。
　　 3.通過RT-qPCR和Western Blotting技術(shù)檢測了TaATG8基因在小麥被葉銹菌侵染

4、后不同時間點的表達量變化。結(jié)果顯示，該基因在RNA水平的表達量在24 h之前兩個組合間沒有差別，但在36h不親和組合中該基因的表達量明顯高于親和組合，且這種差異在48h更為明顯，之后該基因在轉(zhuǎn)錄水平的表達趨于下降，直到120h降到最低;蛋白水平的表達量在不親和組合中在接種后逐漸增加直到36h達到最高，之后有所下降，但在96h的表達量又有回升，而親和組合中一直變化不明顯。初步表明該基因可能參與了小麥抵抗葉銹菌侵染的防衛(wèi)反應(yīng)表達過程