鱖三種生長抑素與兩種受體cDNA全長克隆及組織表達分析.pdf

1、生長抑素(somatostatin，SS)是脊椎動物生長發(fā)育的主要負調(diào)控因子之一,屬于多基因家族,它們通過與生長抑素受體(somatostatin receptor，SSTR)結(jié)合,參與生長激素-胰島素樣生長因子-Ⅰ(GH-IGF-Ⅰ)生長軸的多水平調(diào)節(jié),從而介導生物體的生長發(fā)育。本論文利用cDNA末端快速擴增法(RACE)克隆了鱖(Siniperca chuatsi)腦組織中3種生長抑素前體(preprosomatostatin，PS

2、SⅠ、PSSⅡ和PSSⅢ) cDNA全長序列。結(jié)果顯示,鱖 PSSⅠ cDNA全長647 bp,包含開放閱讀框(ORF)369 bp,共編碼122個氨基酸,前26個氨基酸為信號肽,C端 SS-14在脊椎動物中非常保守;PSSⅡ cDNA全長655 bp,開放閱讀框387 bp,編碼128個氨基酸,前25個氨基酸為信號肽,C端帶有[Tyr7，Gly10]SS-14;PSSⅢ cDNA全長823 bp,開放閱讀框333 bp,共編碼110個

3、氨基酸,前21個氨基酸為信號肽,C端帶有[Pro2]SS-14。利用RT-PCR技術(shù)檢測了鱖 PSS mRNA的組織表達特征,3種 PSS mRNA均在腦組織中表達,PSSⅠ mRNA在其他組織中未見表達,PSSⅡmRNA在食道和胃中大量表達,PSSⅢ mRNA在腎和性腺中大量表達。推測3種 PSS除一致參與中樞神經(jīng)激素調(diào)控外,PSSⅡ還參與消化作用調(diào)控,PSSⅢ參與調(diào)控生殖作用。對腦組織原位雜交分析表明,PSSⅠ mRNA在下丘腦和延

4、腦中表達,PSSⅡmRNA在下丘腦中表達,PSSⅢ mRNA在下丘腦、視覺蓋、延腦和脊髓中均有表達。3種 PSS均在下丘腦表達,進一步表明它們可參與神經(jīng)內(nèi)分泌中心調(diào)節(jié)。在其他腦區(qū)的表達差異,推測不同生長激素還參與其他神經(jīng)生理調(diào)控和發(fā)育調(diào)節(jié),兼有其他生物學效應(yīng)。
　　在獲得三種生長抑素基因的基礎(chǔ)上,利用RACE技術(shù)進一步克隆獲得了鱖腦中2種生長抑素受體(SSTR2和SSTR3)cDNA全長序列。鱖 SSTR2 cDNA全長1820

5、bp,含開放閱讀框1146 bp,共編碼382個氨基酸;SSTR3 cDNA全長1874 bp,含開放閱讀框1458 bp,共編碼486個氨基酸。SSTR由5個部分組成:N端區(qū)域、7個轉(zhuǎn)膜區(qū)(TMD)、3個細胞外袢(ECLs)、4個細胞內(nèi)袢(ICLs)和C末端區(qū)域。NJ系統(tǒng)進化樹結(jié)果顯示,鱖 SSTR2和SSTR3分別形成相對獨立的分支,兩者氨基酸序列相似度為51.2％,表明它們是由不同基因編碼而成。利用實時熒光定量RT-PCR技術(shù)檢測

6、了 SSTR2和SSTR3 mRNA的組織表達特征,它們均在多種組織中廣泛表達。其中,SSTR2 mRNA在肝臟中表達量最高,其次是腦、脾臟、性腺和幽門垂,心臟、食道、胃、腸道中表達量較低。SSTR3 mRNA在胃中表達量最高,其次是腦、食道、腎和性腺,鰓和幽門垂中表達量較低。SSTR2和SSTR3 mRNA均在腦中表達,與三種 PSS均在腦中表達一致,推測鱖 SS主要參與腦中的神經(jīng)和激素調(diào)控。SSTR2 mRNA在肝臟中表達量最高,S