山東和安徽地區(qū)三種蔬菜病毒檢測與鑒定.pdf

1、番茄及辣椒都是重要的經(jīng)濟(jì)作物，近年來病毒病的爆發(fā)導(dǎo)致了番茄和辣椒產(chǎn)量減少和品質(zhì)的降低，造成了嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失。隨著各種檢測手段的發(fā)展，我們可以更迅速、更便捷的鑒定病毒病的種類，并采取相關(guān)措施挽回經(jīng)濟(jì)損失。
　　本研究以番茄黃花曲葉病毒(Tomatoyellow leaf curl virus，TYLCV)、番茄褪綠病毒(Tomato chlorosis virus，ToCV)及辣椒輕斑駁病毒(Pepper mild mottle v

2、irus，PMMoV)為對象，用分子檢測方法完成山東、安徽兩省病原的鑒定。我們選取山東、安徽兩個(gè)省7個(gè)地區(qū)，針對3種病毒病進(jìn)行田間調(diào)查，采集疑似樣品擴(kuò)增序列，對其進(jìn)行同源性比對和遺傳進(jìn)化樹等分析，進(jìn)一步了解山東、安徽兩省蔬菜產(chǎn)區(qū)3種病毒病的發(fā)生情況。主要研究結(jié)果如下:
　　1、通過對山東省、安徽省TYLCV發(fā)生情況的調(diào)查及檢測可知，目前TYLCV在山東省大部及安徽省局部已經(jīng)發(fā)生擴(kuò)散。構(gòu)建的TYLCV系統(tǒng)進(jìn)化樹可以分為IL、IR、M

3、ild、Gez4組，其中本研究的4個(gè)分離物和中國所有的分離物一起聚類在IL組。對感病TYLCV樣品進(jìn)行衛(wèi)星DNA的檢測，沒有獲得明顯目的條帶。
　　2、通過RT-PCR檢測及序列分析，首次確定ToCV在安徽地區(qū)發(fā)生，且統(tǒng)計(jì)發(fā)現(xiàn)兩省六個(gè)地區(qū)ToCV、TYLCV存在單獨(dú)侵染及復(fù)合侵染。分別基于ToCV CP和ToCV HSP70構(gòu)建系統(tǒng)進(jìn)化樹，結(jié)果發(fā)現(xiàn)ToCV分離物都可分為兩個(gè)大組，其中本研究所得到的分離物均與中國其他地區(qū)的分離物聚類

4、到Ⅰ組。通過計(jì)算分離物ToCV的CP與HSP70兩個(gè)基因的同義突變(dS)和非同義突變(dN)的比率(dN/dS)，結(jié)果顯示，CP與HSP70基因均處于負(fù)向（或凈化）選擇的壓力之下且所承受的壓力不同。
　　3、通過對山東濟(jì)寧辣椒的田間調(diào)查發(fā)現(xiàn)，PMMoV在辣椒葉片上呈現(xiàn)輕微的褪綠或者斑駁癥狀。對山東濟(jì)寧辣椒病株進(jìn)行RT-PCR擴(kuò)增，經(jīng)鑒定，確定其病原為PMMoV，表明感病的濟(jì)寧辣椒樣品確系被PMMoV感染。并與日本分離物(AB06