高通量測(cè)序檢測(cè)單側(cè)輸尿管梗阻大鼠腎組織中的microRNA表達(dá).pdf

1、論文題目：直適量型莊撿型望倒撿屋筻捶墮去鼠豎組堡生的墮i￡!Q基叢△垂鯊答辯委員會(huì)主席：迕噩噩答辯委員會(huì)成員：捏籃國(guó)型塑論文答辯日期：2Q!!生旦!旦——!!!!!!!!!!!高通量測(cè)序檢測(cè)單側(cè)輸尿管梗阻大鼠腎組織中的microRNA表達(dá)碩士研究生：謝媚排i導(dǎo)師：蘇震豐任醫(yī)師中文摘要：目的：觀察microRNA(miRNA)在大鼠單側(cè)輸尿管梗阻(unilateralureteralobstruction，UUO)模型腎組織中的表達(dá)變化，

2、篩選與腎問(wèn)質(zhì)纖維化(renalinterstitialfibrosis，RIF)相關(guān)的特異性miRNA。方法：28只雄性SpragueDawlay(SD)大鼠，隨機(jī)分為UUO組和假手術(shù)對(duì)照組，于術(shù)后i天、3天處死。UUO組和假手術(shù)組腎組織行HE染色和Masson染色觀察腎小管間質(zhì)病變程度。實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)UUO組和假手術(shù)組腎組織細(xì)胞外基質(zhì)膠原I(CollagenIColI)和纖連蛋白(Fibronectin，F(xiàn)N)的mRNA水平。

3、提取術(shù)后1天和術(shù)后3天的UUO組大鼠手術(shù)側(cè)和非手術(shù)側(cè)腎臟組織總RNA，進(jìn)行高通量測(cè)序，即Solexa洲序。對(duì)于洲序所得的數(shù)據(jù)進(jìn)行小RNA信息分析，篩選有顯著差異表達(dá)的miRNA。將兩次測(cè)序中有顯著差異表達(dá)的5l條miRNA“fold—change【1_3)使用Targetsan5l數(shù)據(jù)庫(kù)預(yù)測(cè)靶mRNA對(duì)靶mRNA進(jìn)行OeneOntology和pathway分析獲得有顯著性意義的靶mRNA。利用miRNA與靶mRNA之間的靶向澗控關(guān)系，構(gòu)

4、建microRNAGene網(wǎng)絡(luò)圖，同時(shí)利用圖論的方法對(duì)網(wǎng)絡(luò)中miRNA和gene在網(wǎng)絡(luò)中的調(diào)控地位進(jìn)行評(píng)價(jià)，評(píng)價(jià)的標(biāo)準(zhǔn)以度來(lái)衡量。對(duì)于度雖高的11個(gè)miP(=qA使用實(shí)時(shí)熒光定量PCR來(lái)檢測(cè)UUO組相對(duì)于假手術(shù)組的表達(dá)量以及UUO組手術(shù)側(cè)相對(duì)于非手術(shù)側(cè)裘達(dá)量。結(jié)果：l刖m睛理結(jié)果：假手術(shù)組腎臟未見(jiàn)明顯病變。術(shù)后l天UUO組梗阻側(cè)腎組織小管管腔擴(kuò)張和間質(zhì)水腫不明顯，小球結(jié)構(gòu)正常。術(shù)后3天塒O組梗阻側(cè)腎組織可見(jiàn)灶狀小管上皮扁平化伴管腔擴(kuò)張，