EGM合成工藝優(yōu)化、結(jié)構(gòu)表征及其體外吸附霉菌毒素的能力和對淋巴細(xì)胞的保護(hù)作用.pdf

1、試驗一酯化葡甘露聚糖合成工藝優(yōu)化試驗
　　 為了獲得吸附能力更好的酯化葡甘露聚糖（EGM），本試驗選用4種方法對魔芋葡甘露聚糖(KGM)進(jìn)行改性。研究了合成EGM所需的最優(yōu)六偏磷酸鈉、焦磷酸鈉、正磷酸鹽和氯磺酸與KGM的質(zhì)量比、pH、反應(yīng)溫度、反應(yīng)時間。由此得出，六偏磷酸鈉法合成EGM的最優(yōu)條件為:六偏磷酸鈉與KGM質(zhì)量比1∶6.5、pH值3.0、反應(yīng)溫度75℃、反應(yīng)時間130min。焦磷酸鈉法合成EGM的最優(yōu)條件為:焦磷酸鈉與

2、KGM質(zhì)量比1∶7、pH值3.0、反應(yīng)溫度75℃、反應(yīng)時間120min。正磷酸鹽法合成EGM的最優(yōu)條件為:正磷酸鹽與KGM質(zhì)量比1∶5、pH值6.0、反應(yīng)溫度120℃、反應(yīng)時間90min。氯磺酸法合成EGM的最優(yōu)條件為:KGM質(zhì)量與氯磺酸體積比4∶10、反應(yīng)溫度50℃、反應(yīng)時間7h。
　　 試驗二EGM對4種霉菌毒素體外吸附能力的研究
　　 為了檢驗利用不同方法合成的EGM吸附霉菌毒素的能力，向含有霉菌毒素(黃曲霉毒素B

3、1(AFB1)、嘔吐毒素(DON)、玉米赤霉烯酮(ZEN)或煙曲霉毒素B1(FB1)的溶液中加入霉可吸、KGM、EGM1號、EGM2號、EGM3號、EGM4號各0.1g充分混勻，在溫度為37℃的控溫?fù)u床中反應(yīng)，試驗至8h，3000r/m離心10min，分別取上清液檢測霉菌毒素的含量。結(jié)果表明，霉可吸對AFB1、DON、ZEN和FB1的吸附力分別為301.20μg/g、101.98μg/g、273.56μg/g和333.57μg/g;GM

4、對AFB1、DON、ZEN和FB1的吸附力分別為241.72μg/g、102.51μg/g、369.24μg/g和313.23μg/g;EGM1號對AFB1、DON、ZEN和FB1的吸附力分別為400.30μg/g、182.64μg/g、398.19μg/g和356.45μg/g;EGM2號對AFB1、DON、ZEN和FB1的吸附力分別為367.50μg/g、170.35μg/g、345.66μg/g和319.66μg/g;EGM3號對

5、AFB1、DON、ZEN和FB1的吸附力分別為146.44μg/g、158.07μg/g、159.15μg/g和316.41μg/g;EGM4號對AFB1、DON、ZEN和FB1的吸附力分別為150.32μg/g、162.19μg/g、273.39μg/g和316.90μg/g。整體來看，EGM1號吸附霉菌毒素的效果優(yōu)于同類產(chǎn)品，有良好的應(yīng)用前景。
　　 試驗三EGM結(jié)構(gòu)表征
　　 本試驗利用紅外光譜法、凝膠色譜法、高效

6、液相色譜法和固體核磁共振法對六偏磷酸鈉法合成的EGM進(jìn)行表征。由此得出，EGM分子量為1.78×106，D-甘露糖∶D-葡萄糖為1.91∶1，在EGM的C6、C3、C2位都發(fā)生了酯化反應(yīng)，結(jié)合上了PO3-和(PO3-)6，結(jié)合程度C6＞C3＞C2。
　　 試驗四EGM吸附毒素對體外培養(yǎng)的雞外周血淋巴細(xì)胞保護(hù)效應(yīng)
　　 將濃度為5.0×106個/mL的雞外周血淋巴細(xì)胞分8組，每組4個重復(fù)。第1組為空白對照;第2組為陽性對照

7、，添加霉菌毒素(10μg/mLAFB1、2.5μg/mLDON、5μg/mLZEN或5μg/mLFB1);第3～5組分別加入0.05％、0.10％和0.15％的EGM;第6～8組在加入霉菌毒素（10μg/mLAFB1、2.5μg/mLDON、5μg/mLZEN或5μg/mLFB1）基礎(chǔ)上分別加入0.05％、0.10％和0.15％的EGM。在37℃、5％CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)72h。檢測淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率和細(xì)胞培養(yǎng)液中IL-2、IFN-α和MDA

8、含量以及SOD活性。結(jié)果表明，培養(yǎng)基中添加0.05％、0.10％和0.15％EGM對外周血淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率、IL-2含量、IFN-α含量和MDA含量以及SOD活性、無顯著影響（P＞0.05）或能顯著提高IL-2含量和IFN-α含量(P＜0.05);10μg/mLAFB1、2.5μg/mLDON、5μg/mLZEN和5μg/mLFB1均能顯著降低外周血淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率，使IL-2和IFN-α含量減少，MDA含量增加，SOD活性降低（P＜0.0