豬輪狀病毒油乳劑滅活疫苗的制備及免疫性試驗(yàn).pdf

1、豬輪狀病毒(Porcine Rotavirus, PRV)屬呼腸病毒科輪狀病毒屬成員，是引起仔豬病毒性腹瀉的重要病原之一，該病在世界范圍內(nèi)普遍存在，給世界各地的畜牧業(yè)造成嚴(yán)重的損失。該病主要感染幼畜，1~10日齡仔豬感染后發(fā)病率可超過(guò)80％，死亡率高達(dá)50％~100％。主要癥狀為嚴(yán)重腹瀉，部分病例因嚴(yán)重脫水、酸堿平衡失調(diào)并且繼發(fā)感染而死亡。目前還沒(méi)有治療輪狀病毒腹瀉的特效藥物。接種疫苗來(lái)預(yù)防輪狀病毒感染顯得尤為重要。因此，世界衛(wèi)生組織多

2、次呼吁各國(guó)科學(xué)家研制開(kāi)發(fā)有效的輪狀病毒疫苗，并將其列為最優(yōu)先發(fā)展的疫苗項(xiàng)目之一。
　　 本實(shí)驗(yàn)制備了豬輪狀病毒油乳劑甲醛和BEI滅活疫苗，并以家兔為模型動(dòng)物，肌肉接種后進(jìn)行了疫苗免疫原性的測(cè)定。
　　 將豬輪狀病毒分離株JL94株在恒河猴腎細(xì)胞系（MA-104）細(xì)胞系上傳代，通過(guò)電鏡技術(shù)、RT-PCR、序列測(cè)定和間接免疫熒光對(duì)豬輪狀病毒毒種進(jìn)行了鑒定，證明該病毒為典型的豬輪狀病毒。將該病毒在MA-104上傳代增殖，當(dāng)病毒

3、傳至第58代，滴度達(dá)到108.25TCID50/ml，制備出基礎(chǔ)種毒。并對(duì)種毒進(jìn)行了細(xì)菌和支原體檢測(cè)，檢測(cè)結(jié)果均為陰性。將其擴(kuò)大培養(yǎng)，制備了生產(chǎn)種毒，作為制備疫苗的抗原液。
　　 將該抗原液分別用甲醛和BEI滅活，制備油佐劑疫苗，然后肌肉免疫接種家兔。將家兔隨機(jī)分為3組，每組3只，分別命名為甲醛組、BEI一免組和BEI二免組。該疫苗注射家兔后均未引起動(dòng)物的發(fā)病與死亡，注射部位未見(jiàn)明顯的病理變化，免疫家兔無(wú)任何不良反應(yīng)，精神、食欲

4、良好，證明了該疫苗安全性良好。
　　 免疫后，每隔一周耳靜脈取血，分離血清，用間接ELISA法和病毒在細(xì)胞水平上的中和試驗(yàn)檢測(cè)血清中特異性IgG抗體。通過(guò)間接ELISA檢測(cè)表明，甲醛組家兔在一免時(shí)抗體水平升高不明顯，未檢測(cè)出抗體效價(jià)，在免后2w進(jìn)行加強(qiáng)免疫，加強(qiáng)免疫后1w的抗體水平明顯升高，達(dá)到峰值為1:9600，接著進(jìn)入了下降階段，14w至17w，ELISA抗體效價(jià)維持在1:1200；而B(niǎo)EI一免組和二免組家兔血清中IgG抗體

5、效價(jià)均有明顯的上升，峰值均為1:9600，至免疫后的21w一免組的抗體效價(jià)仍能維持在1:1000，二免組為1:4000；中和試驗(yàn)結(jié)果表明，甲醛組首次免疫后中和抗體效價(jià)升高緩慢，第3w加強(qiáng)免疫后中和抗體效價(jià)有明顯的升高趨勢(shì)，峰值為1:969，后逐漸降低，檢測(cè)到15w降低到1:255；而B(niǎo)EI一免組和二免組家兔，抗體效價(jià)變化規(guī)律基本一致，均在第3w抗體效價(jià)明顯升高，一免組和二免組中和抗體效價(jià)峰值均為1:1800，于免疫后14w抗體效價(jià)開(kāi)始緩