雞抗RA蛋黃抗體消除油乳劑滅活疫苗免疫空白期的研究.pdf

1、自詹拉發(fā)明牛痘苗以來,疫苗是防控疫病的主要武器。根據(jù)微生物是否成活,疫苗被分為活疫苗和滅活疫苗兩大類。研究表明,動(dòng)物接種疫苗后需要經(jīng)過一定時(shí)間才能產(chǎn)生出堅(jiān)強(qiáng)免疫力。在疫苗學(xué)中,將疫苗接種至免疫力產(chǎn)生需要的時(shí)間稱為誘導(dǎo)期。在誘導(dǎo)期內(nèi),動(dòng)物處于易感狀態(tài),如遇病原侵襲則發(fā)病,因此這一時(shí)期又被稱之為免疫空白期。滅活疫苗因其微生物被殺滅,通常認(rèn)為安全性好,加之采用礦物油等佐劑,使之免疫期也較長(zhǎng),在動(dòng)物防疫中廣泛應(yīng)用。滅活疫苗最大的問題是,誘導(dǎo)期通

2、常為10-14天,接種后免疫空白期太長(zhǎng),時(shí)有免疫失敗發(fā)生。解決滅活疫苗免疫空白期問題顯然為生產(chǎn)實(shí)際所急需。我們提出解決這一問題新思路,即應(yīng)用已經(jīng)可以商品化規(guī)?；a(chǎn)的雞特異蛋黃抗體與滅活疫苗或同時(shí)注射或制成特殊混合制劑,其中的抗體被快速吸收后可在數(shù)小時(shí)內(nèi)產(chǎn)生被動(dòng)免疫保護(hù),抗體的保護(hù)作用遞降后,滅活疫苗誘導(dǎo)的主動(dòng)免疫發(fā)揮作用。這樣就可以保證免疫接種后誘導(dǎo)期為零,實(shí)現(xiàn)消除滅活疫苗的免疫空白期效果。本研究用鴨疫里默氏桿菌(Riemerella

3、anatipestifer,RA)為模式菌,免疫雞獲得其特異蛋黃抗體,然后與其油乳劑滅活疫苗同時(shí)注射,攻毒試驗(yàn)結(jié)果證明,滅活疫苗誘導(dǎo)的主動(dòng)免疫保護(hù)與抗體吸收后的被動(dòng)免疫實(shí)現(xiàn)了疊加,消除了免疫空白期。
　　 鴨傳染性漿膜炎(Infectiousserositis,IS)是鴨的重大疫病之一,各種年齡均可發(fā)病,以1-8周齡發(fā)病率(Morbility,Mb)和死亡率(Mortality,Mt)高,經(jīng)濟(jì)損失很大。IS的病原是RA,有21個(gè)

4、血清型,型間缺乏交叉免疫保護(hù),主要流行血清型為1、2、5等。RA活疫苗和滅活疫苗均有文獻(xiàn)報(bào)道,以后者為主。雛鴨接種RA滅活疫苗后,免疫空白期為10-14天,常以使用RA敏感抗生素彌補(bǔ)防疫空白,生產(chǎn)實(shí)際中存在濫用現(xiàn)象,導(dǎo)致耐藥菌產(chǎn)生和藥物殘留,影響食品安全。因此,研究RA蛋黃抗體與其滅活疫苗同時(shí)注射的免疫效果對(duì)于養(yǎng)鴨業(yè)具有重大意義。本文選擇川渝地區(qū)RA流行主要血清型中的強(qiáng)毒力AF株作為疫苗制備和抗體制備菌種,測(cè)定其對(duì)不同日齡不同品種肉鴨的

5、易感性、免疫原性和制備的油乳劑滅活疫苗免疫后對(duì)肉鴨血細(xì)胞和增重的影響,最后開展了特異蛋黃抗體消除免疫空白期試驗(yàn)。研究取得了以下主要結(jié)果。
　　 1.AF株RA毒力AF株RA對(duì)16日齡花邊肉鴨的LD50為4.8×106.98CFU。該菌株對(duì)不同日齡的花邊肉鴨和櫻桃谷肉鴨的毒力存在差異,對(duì)14-43日齡花邊肉鴨有很強(qiáng)致病力,除14日齡為63.6％和36.4％外,其他日齡的發(fā)病率和死亡率均達(dá)到或超過80％和60％。對(duì)14-55日齡櫻桃

6、谷肉鴨致病力更強(qiáng),除55日齡為54.5％和36.4％外,14、20、35日齡組發(fā)病率和死亡率均達(dá)到或超過90％和80％,28日齡組發(fā)病率和死亡率均超過50％。試驗(yàn)結(jié)果表明,18-20日齡是AF株RA感染花邊肉鴨和櫻桃谷肉鴨的最敏感時(shí)期。
　　 2.AF株RA油乳劑滅活疫苗的免疫誘導(dǎo)期和保護(hù)期AF株RA對(duì)4日齡花邊肉鴨的適宜免疫菌量是菌液濃度A525值為1.944。此劑量組攻毒保護(hù)率最高能達(dá)到100％。RA油乳劑滅活疫苗接種1.0

7、mL/只和2.0mL/只的保護(hù)效果好,但若接種2.0mL/只,劑量太大,可能會(huì)導(dǎo)致吸收不完全。AF株RA油乳劑滅活疫苗免疫4日齡花邊肉鴨和櫻桃谷肉鴨后,疫苗免疫誘導(dǎo)期約為10天,即接種疫苗后10天保護(hù)率可達(dá)80％左右。4日齡櫻桃谷肉鴨接種AF株RA油乳劑滅活疫苗后50天,仍能達(dá)到80％以上的保護(hù)效果。
　　 3.雞抗AF株RA特異蛋黃抗體(RA-cIgY)保護(hù)率消長(zhǎng)規(guī)律AF株RA油乳劑滅活疫苗免疫蛋雞,收集不同時(shí)期RA-cIgY

8、。4日齡雛鴨注射RA-cIgY1mL后20日齡攻毒,結(jié)果是,二免后8-15天和16-25天收集的RA-cIgY組Mb為45.5％,Mt為36.4％；三免后1-14天和15-28天收集的RA-cIgY組發(fā)病率和死亡率均顯著降低,保護(hù)指數(shù)均超過60；三免后29-42天和43-51天保護(hù)指數(shù)最高也只達(dá)到50。由此可知,AF株RA油乳劑滅活疫苗給蛋雞進(jìn)行三免后1-28天收集的RA-cIgY保護(hù)效果最好。
　　 4.RA-cIgY彌補(bǔ)油乳

9、劑滅活疫苗免疫空白期AF株RA滅活抗原三免后1-28天收集的RA-cIgY1mL與AF株RA油乳劑滅活疫苗1mL同時(shí)注射4日齡雛鴨,于免疫后31天,即35日齡攻毒,保護(hù)指數(shù)約為88,與AF株RA油乳劑滅活疫苗單獨(dú)接種組保護(hù)指數(shù)約83差異不明顯.RA-cIgY1mL的發(fā)病率和死亡率與攻毒對(duì)照組相差不大,無保護(hù)率。試驗(yàn)結(jié)果顯示,RA-cIgY對(duì)AF株RA油乳劑滅活疫苗免疫保護(hù)效果沒有影響。10日齡和16日齡雛鴨同時(shí)注射RA-cIgY1mL與

10、AF株RA油乳劑滅活疫苗后4天,即14日齡或20日齡攻毒,試驗(yàn)組保護(hù)指數(shù)均為100,同時(shí)設(shè)置的RA-cIgY1mL組保護(hù)指數(shù)約為80,AF株RA油乳劑滅活疫苗1mL保護(hù)指數(shù)為約為50。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,AF株RA油乳劑滅活疫苗免疫后4天沒有誘導(dǎo)出免疫保護(hù)效果,RA-cIgY無論單獨(dú)注射還是與AF株RA油乳劑滅活疫苗同時(shí)注射均產(chǎn)生出良好的被動(dòng)免疫保護(hù)效果,在滅活疫苗免疫空白期起到了免疫保護(hù)效果。
　　 RA-cIgY與油乳劑滅活疫苗同