豬鏈球菌2型HtrA基因的鑒定及功能研究.pdf

1、分 類 號(hào) 密 級(jí)華 中農(nóng) 業(yè) 大 學(xué) 碩 士 學(xué)位 論 文豬鏈球菌 2 型 H tr A 基 因的鑒定及 功能研 究Id en tifica tio n ， a n dF u n etio n a lS tu d ieso nth eH trAg en efr o mS treP tococcu sS u i sty P e Z碩 士研 究 生 : 吳 浩指 導(dǎo) 教 師 : 金 梅 林 教 授指 導(dǎo) 小 組 : 金 梅 林 教授陳煥

2、春 教 授吳 斌 教授郭 愛(ài)珍 教 授周 銳 教 授專 業(yè) : 預(yù) 防獸 醫(yī)學(xué)獲 得 學(xué)位 名 稱 : 碩 士研 究 方 向: 動(dòng) 物 傳 染 病獲 得 學(xué)位 時(shí) 間 : 2010 年 6 月華 中農(nóng) 業(yè) 大 學(xué)動(dòng) 物 醫(yī)學(xué) 院二 0 一 0 年 六 月豬鏈球菌 2 型 HtrA 基 因的鑒定及功能研 究3. 2. 5 基 因缺 失株 △H t rA 與互補(bǔ)菌株 c△H t rA 的篩選 及 鑒 定 . . . . . . . . .

3、. . . . . ……293. 2. 6 缺 失株 △Ht rA 與互補(bǔ) 菌株 c△Ht rA 的生物 學(xué)特 性 鑒 定 . . . . . . . . . . . . . . ……303. 2. 7 基 因分 布 測(cè) 定 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

4、 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ……333 . 2. 8Ht rA 基 因 的細(xì)胞 相 關(guān)研 究 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

5、……334 結(jié) 果 與 分 析 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ……384. 1

6、 豬 鏈 球 菌 2 型 H t rA 基 因分析 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ……384 .1.1 豬 鏈 球 菌 2 型 H trA 基 因進(jìn) 化 分 析 . . . . . . . . .

7、. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ……384 .1. 2 豬 鏈 球 菌 2 型 H tr A 基 因分 析 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

8、. . . . . . . . ……394. 2 重 組質(zhì) 粒 pE T-犯a (+) 一 H tr A 構(gòu)建 與鑒 定 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ……414. 2. 1 豬 鏈 球 菌 2 型 Ht rA 基 因克 隆和 重 組質(zhì)粒 酶切 鑒 定 ……‘ . . . . .

9、. . . . . . . . . . ……414. 2. 2 重 組質(zhì) 粒 pE T-犯a (+) 一 Ht rA 測(cè)序 結(jié)果 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ……424 . 3 重 組 pE T-32a (+) 一 Ht rA 蛋 白表 達(dá) 、純 化 . . . . . . . . . . . . ……，

10、. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ……444 . 3.1 重 組 pE T-32 a (+ ) 一 Ht rA 蛋 白表 達(dá) 純 化 鑒 定 結(jié) 果 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ……444 . 3. 2 重 組 pE T-32 a (+) 一 Ht rA 蛋 白 We stemBl ott

11、 ing 結(jié) 果 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ……444 . 3. 3 重 組 pE T-32 a (+) 一 Ht rA 蛋 白定 量 結(jié)果 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ……454. 4 重 組 H tr A 蛋 白小 鼠免疫 與保 護(hù) 力測(cè) 定 .

12、 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ……464 . 4 . 1 小 鼠免疫后 E LISA 抗 體和 IgG 亞類 測(cè) 定 結(jié)果 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ……464 .

13、4 . 3 小 鼠保 護(hù) 力測(cè) 定 . ……， . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ……464. 5 基 因缺 失株 △Ht rA 與互補(bǔ) 菌株 c△Ht rA 的篩選 及 鑒 定 .

14、 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ……474 . 5.1 同源 重 組 pSE T 4s一 △H tr A 和 互 補(bǔ) PS E T Zs一 c△Ht rA 質(zhì) 粒 的鑒 定 . . ……474 . 5. 2 基 因缺 失菌株 △H tr A 和 互補(bǔ) 菌 株 c△H tr A 篩選 、鑒 定 . . . . . . . . . . . . . . ……484 . 6

15、基 因缺 失株 △Ht rA 與 互 補(bǔ) 菌 株 生物 學(xué)特 性 鑒 定 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ……494 . 6.1 革 蘭 氏染 色 結(jié)果 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

16、 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ……494 . 6. 2 生 長(zhǎng) 特 性 測(cè) 定 . . . . . . ……， . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

17、. . . . . . . . . . . . . . . . . . . ……494 . 6. 3 遺 傳 穩(wěn) 定 性 鑒 定 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

18、 . . ……504 . 6. 4 溶 血 活 性 測(cè) 定 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ……504 . 6. 5 溫 度 敏 感 性

19、 試 驗(yàn) . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . … …514 . 6. 6 氧 化 壓 力測(cè) 定 ……， . . . . . . . . . . . . . .

20、 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ……514 . 6. 7 絲 裂 霉 素 C 與膘 吟霉 素壓 力試 驗(yàn) ， . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

21、. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ……524 . 6. 8pH 耐 受試 驗(yàn) . . . . . . . . . ……、 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

22、. . . . . . ……544 . 6. 9N aC I滲 透 壓 壓 力試 驗(yàn) . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ……554 . 6. 10 應(yīng) 激 反應(yīng) 定量 實(shí)驗(yàn) 二 ， . .

23、. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ……564 . 6.H 小 鼠感 染 實(shí)驗(yàn) . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

24、. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ……574. 7H t rA 基 因在 各 種 標(biāo) 準(zhǔn) 菌 株 血 清 型 中 的分 布 . . . . …… _. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .