初生烏骨雞肝臟差異顯示ESTs的篩選及分析.pdf

1、本試驗分別以1日齡絲羽烏骨雞(SK)、常羽烏骨雞(NP)、蘇禽蛋雞(SQ)、愛拔益加肉雞(AA)肝臟為研究材料，期望在排除飼養(yǎng)條件等環(huán)境因素對基因表達的影響下，比較初生蛋雞、肉雞和烏骨雞基因表達上的差異。　　采用26堿基的三個錨定引物與24個隨機引物之間共72個組合的逆轉(zhuǎn)錄PCR反應(yīng)對1日齡絲羽烏骨雞、常羽烏骨雞、蘇禽96型蛋雞、AA肉雞肝臟總RNA進行DDRT-PCR分析，并利用非變性聚丙烯酰胺凝膠電泳結(jié)合銀染技術(shù)分離DDRT-PC

2、R產(chǎn)物，共獲得四個品種間差異條帶251條。經(jīng)過PCR再擴增、電泳檢測和純化，共得到差異顯示的cDNA片段220條(重擴增率為87.6％)。經(jīng)SSCP檢測獲得198個重擴增產(chǎn)物表現(xiàn)為單一cDNA的帶型，單一條帶率為90％。經(jīng)過基因芯片雜交掃描，比較綜合掃描數(shù)據(jù)獲得8個真實的差異表達cDNA片段，委托上海生物工程公司克隆測序，獲得4個ESTs序列。4個差異顯示ESTs較短，且經(jīng)1％瓊脂糖電泳檢測顯示這些條帶比非差異顯示條帶弱，推測差異表達的

3、基因表達豐度低。　　四個差異顯示ESTs去除質(zhì)粒污染序列后向Genbank提交，獲得登陸號DQ003271-DQ003274。經(jīng)與雞基因組比對，分別進行了定位。具體定位是DQ003271：5號染色體；DQ003272：3號染色體；DQ003273：線粒體；DQ003274：19號染色體。其中DQ003271為家雞新的EST，推測其功能與包含卷曲螺旋結(jié)構(gòu)的蛋白的表達有關(guān)。其余3個為家雞已知表達序列標簽，其中DQ003272在機體免疫功能