膀胱癌中差異表達的lncRNA篩選及功能分析.pdf

1、目的：通過基因芯片篩查膀胱癌組織及癌旁正常組織中l(wèi)ncRNA及mRNA的差異表達，發(fā)現(xiàn)與膀胱癌發(fā)病相關(guān)的lncRNA及mRNA，分析差異表達基因的生物學(xué)功能；對篩選到的差異表達基因lncRNA-n336928及SPP1在大樣本的膀胱癌患者組織中進行驗證，并分析其與膀胱癌患者臨床病理相關(guān)指標及預(yù)后的相關(guān)性；體外實驗明確lncRNA-n336928在膀胱癌發(fā)生進展中的作用，并探討相關(guān)的分子機制
　　方法：采用基因芯片的方法檢測3例膀胱

2、癌組織及對應(yīng)的癌旁正常組織中l(wèi)ncRNA與mRNA的表達情況，并對芯片結(jié)果進行統(tǒng)計學(xué)分析，確定膀胱癌組織及癌旁正常組織lncRNA與mRNA的差異表達譜,并采用qRT-PCR的方法進行驗證，對差異表達基因進行富集分析及GO分析，預(yù)測差異表達基因的生物學(xué)功能；在95例膀胱癌組織及癌旁正常組織中采用 qRT-PCR的方法檢測lncRNA-n336928及SPP1 mRNA的差異表達情況，通過卡方檢驗分析lncRNA-n336928及SPP1

3、 mRNA的表達量與膀胱癌患者臨床病理指標的相關(guān)性，通過Kaplan-Meier生存曲線及COX比例風(fēng)險回歸模型分析lncRNA-n336928及SPP1 mRNA的表達量與入組膀胱癌患者5年生存率的關(guān)系，通過sperman相關(guān)分析明確lncRNA-n336928與SPP1 mRNA表達的相關(guān)性；qRT-PCR檢測評估膀胱癌不同細胞系中l(wèi)ncRNA-n336928的表達情況，體外實驗干擾lncRNA-n336928在膀胱癌細胞系中的表達

4、，采用CCK-8及Brdu實驗檢測lncRNA-n336928對膀胱癌細胞增殖的影響，采用細胞劃痕實驗及 transwell侵襲實驗檢測lncRNA-n336928對膀胱癌細胞遷移侵襲的影響，通過 qRT-PCR及 westernblot檢測lncRNA-n336928表達改變后SPP1 mRNA及蛋白表達的變化。
　　結(jié)果：基因芯片發(fā)現(xiàn)膀胱癌組織及癌旁正常組織存在lncRNA和mRNA的差異表達，差異表達基因主要參與到PI3K-

5、AKT，focal adhesion，ECM-receptor信號通路中；lncRNA-n336928及SPP1 mRNA在膀胱癌組織中的表達量明顯高于癌旁正常組織，且與膀胱癌患者臨床分級、病理分級密切相關(guān)，與腫瘤大小、腫瘤數(shù)目、患者年齡、性別及患者吸煙史沒有明顯的相關(guān)性，Kaplan-Meier生存分析發(fā)現(xiàn)lncRNA-n336928高表達組患者5年生存率明顯差于lncRNA-n336928低表達組，COX比例風(fēng)險回歸分析發(fā)現(xiàn) lnc

6、RNA-n336928可能為膀胱癌患者不良預(yù)后的獨立影響因子，而SPP1 mRNA的表達量與患者的5年生存率沒有明顯的相關(guān)性；CCK-8及Brdu實驗證實lncRNA-n336928的異常表達對膀胱癌細胞的增殖能力沒有明顯的影響，細胞劃痕實驗證實異常表達的lncRNA-n336928參與調(diào)節(jié)膀胱癌細胞的遷移，transwell侵襲實驗證實異常表達的lncRNA-n336928參與調(diào)控膀胱癌細胞的侵襲行為， qRT-PCR及 wester

7、nblot實驗證實， lncRNA-n336928表達發(fā)生改變后，SPP1 mRNA及蛋白的表達均發(fā)生相應(yīng)的變化。
　　結(jié)論：在膀胱癌的發(fā)生進展過程中涉及到 lncRNA表達調(diào)控的異常， lncRNA-n336928在膀胱癌組織中異常高表達，高表達的 lncRNA-n336928可能為膀胱癌患者不良預(yù)后的獨立危險因子，lncRNA-n336928對膀胱癌細胞的增殖沒有明顯的調(diào)控作用，lncRNA-n336928可能參與調(diào)控膀胱癌細