葡萄白藜蘆醇合成酶基因的克隆及轉化水稻的研究.pdf

1、白藜蘆醇是植物在惡劣環(huán)境下或遭到病原體侵害時產(chǎn)生的一種次生代謝物,具有預防心血管疾病、抗腫瘤作用、調節(jié)機體免疫反應等重要生理功能。白藜蘆醇合成酶是白藜蘆醇生物合成途徑的關鍵酶,催化1分子4-香豆烯輔酶A(p-coumaroyl-COA)和3分子丙二酰輔酶A(malonyl-CoA)形成白藜蘆醇。
　　 本研究從葡萄中克隆出白藜蘆醇合成酶基因,構建其雙T-DNA植物表達載體(可消除轉基因植物中選擇標記基因帶來的安全隱患),并遺傳轉

2、化到水稻中,使其在水稻的胚和糊粉層中特異性高效表達,有望創(chuàng)制出稻米中含有白藜蘆醇的功能稻新種質,進而有效提高稻米的附加值,擴大稻米(米糠)的利用范圍。
　　 主要研究結果如下:
　　 (1)白藜蘆醇合成酶基因的克隆:采用RT-PCR技術,從葡萄品種“GQ”的葉片中克隆獲得白藜蘆醇合成酶基因RS。與登錄號為XM002265296.1等的核酸序列比對,同源性達99％,葡萄RS基因全長1,179bp,編碼392個氨基酸。

3、>　　 (2)RS基因雙T-NDA植物表達載體的構建:構建了含有RS基因的雙T-NDA植物表達載體pcdmar-ole18-RS,該載體的一個T-DNA區(qū)含有潮霉素抗性基因hpt;另一個T-DNA區(qū)含有RS基因,由水稻Ole18基因啟動子驅動RS基因表達,同時RS基因表達框的兩側連有兩段正向重復的煙草Rb7MARs,以增強RS基因的表達。
　　 (3)轉RS基因水稻的獲得:采用農(nóng)桿菌介導的方法,將重組表達載體導入到優(yōu)質水稻品種