花生白藜蘆醇合酶基因?qū)湍负透收岬倪z傳轉(zhuǎn)化.pdf

1、白藜蘆醇(resveratrol，Res)是一種重要的植物抗毒素，除了有提高植物抵抗病原體的能力外，還具有多種有益于人類健康的生理活性。白藜蘆醇合酶(resveratrol synthase，RS)是催化合成白藜蘆醇的關(guān)鍵酶之一。 本研究以花生白藜蘆醇合酶基因為基礎(chǔ)，構(gòu)建酵母表達(dá)載體及Ubi啟動子驅(qū)動的單子葉植物表達(dá)載體，利用電穿孔法將A藜蘆醇合酶基因整合到畢赤酵母GS115的染色體上，為下一步利用酵母作為生物反應(yīng)器，大量表達(dá)該

2、蛋白，應(yīng)用于大規(guī)模的工業(yè)化生產(chǎn)白藜蘆醇合酶提供載體；利用基因槍及農(nóng)桿菌介導(dǎo)轉(zhuǎn)化法將白藜蘆醇合酶基因轉(zhuǎn)導(dǎo)甘蔗，獲得含白藜蘆醇合酶基因的轉(zhuǎn)基因苗，為培育抗逆性強(qiáng)的甘蔗新品種，作為生產(chǎn)白藜蘆醇的原料打下基礎(chǔ)。 本研究成功地構(gòu)建了花生白藜蘆醇合酶基因的酵母表達(dá)載體pPIC9K-RS，并通過電穿孔法將其整合到畢赤酵母GS115的染色體上。成功地構(gòu)建了由Ubi啟動子驅(qū)動的花生白藜蘆醇合酶基因單子葉植物表達(dá)載體pA5-RS，分別利用農(nóng)桿菌介導(dǎo)

3、和基因槍轉(zhuǎn)化法將其轉(zhuǎn)導(dǎo)甘蔗。以培養(yǎng)25 d的胚性愈傷組織為最佳受體材料，農(nóng)桿菌侵染濃度為OD<,600>=0.8，侵染時間10 min，AS活化濃度200 μmol/L，共培養(yǎng)時間2 d，在含羧卞青霉素150 mg/L+潮霉素50mg/L的培養(yǎng)基上進(jìn)行篩選培養(yǎng)；基因槍轉(zhuǎn)化法的轟擊系數(shù)為轟擊壓力1 100 psi，轟擊距離6cm，真空度28 inchs Hg。通過PCR檢測，農(nóng)桿菌介導(dǎo)轉(zhuǎn)化法獲得的5株抗性苗中1株為陽性苗，基因槍轉(zhuǎn)化法獲得