白藜蘆醇合酶基因?qū)Σ葺z傳轉(zhuǎn)化的研究.pdf

1、植物次生代謝物(Plant secondary metabolites)白藜蘆醇(Resveratrol，Res)是一種植物保護(hù)素(Phytoalexin)，對(duì)病原菌有防御作用。該化合物是一種抗氧化劑，具有抗癌、抗炎、預(yù)防心血管疾病等保健功能。但自然界中存在的Res量比較少，因此利用生物技術(shù)合成Res成為必然。白藜蘆醇合酶(Resveratrol synthase， RS)是Res生物合成中的關(guān)鍵酶，將RS基因置于草莓果實(shí)特異性啟動(dòng)子R

2、J39的調(diào)控下轉(zhuǎn)化草莓，從而提高其抗性及營養(yǎng)品質(zhì)。本論文的具體工作如下：
　　 1、根據(jù)NCBI上己登錄的RS基因的保守區(qū)域設(shè)計(jì)短片段的引物，采用PCR方法，分別從蛇葡萄(Ampelopsis aconitifolia)、川鄂爬山虎(Parthenocissus henryana)、五葉爬山虎(P.quinquefolia)、三葉爬山虎(P．himalayana)、桑樹(Morus alba L.)、律草(Humulus sca

3、ndens)、花生(Arachis hypogaea)DNA中克隆了RS基因片段(635bp)，測序結(jié)果顯示這七個(gè)片段中不含有內(nèi)含子，它們分別編碼211個(gè)氨基酸。
　　 2、根據(jù)葡萄RS基因的開放閱讀框(ORF)設(shè)計(jì)引物，采用RT-PCR方法，從葡萄科植物川鄂爬山虎(Parthenocissus henryana)總RNA中克隆了RS全長序列(1.179kb)，其編碼392個(gè)氨基酸。
　　 3、利用PCR方法，從草莓基因

4、組中克隆了果實(shí)特異性啟動(dòng)子RJ39，序列全長860bp。通過在線分析軟件PlantCare分析，該序列具有TATA-box、CAAT-box、G-box和I-box等功能域，具有典型的果實(shí)特異性啟動(dòng)子特征。
　　 4、把克隆的RS基因置于草莓果實(shí)特異性啟動(dòng)子RJ39的調(diào)控下，用除草劑抗性基因(bar)做選擇標(biāo)記，構(gòu)建了植物表達(dá)載體pCAMBIA3300-RJ39-RS-Tnos，通過農(nóng)桿菌介導(dǎo)的葉盤法轉(zhuǎn)化草莓(Fragaia a