鰱魚性別特異片段的篩選和克隆.pdf

1、性別決定類型的確定和性染色體的識別是研究魚類性別決定分子機(jī)制的基礎(chǔ)。大多數(shù)魚類的性別決定機(jī)制很原始，性染色體的分化還處于萌芽狀態(tài)。因此魚類的性染色體與常染色體在形態(tài)上無法區(qū)分，致使目前發(fā)現(xiàn)性染色體的魚類僅占很小的比例。在已發(fā)現(xiàn)性染色體的魚類中，雌雄個體基因組水平上的差異較小，傳統(tǒng)的細(xì)胞遺傳學(xué)技術(shù)難以鑒定性別。隨著分子生物學(xué)發(fā)展，利用DNA分子標(biāo)記技術(shù)尋找魚類性別特異片段的成功事例不斷涌現(xiàn)。
　　 魚類主要為遺傳型性別決定類型，但

2、其性別分化容易受到環(huán)境因素的影響而出現(xiàn)性反轉(zhuǎn)現(xiàn)象，發(fā)育成與遺傳型相反的性別。然而魚類性別的遺傳組成并不因自身生理和外界環(huán)境的變化而變化，所以找出性別特異的DNA片段作為性決定遺傳的分子基礎(chǔ)對于研究魚類性別決定及分化機(jī)制和指導(dǎo)單性魚苗的培育等將具十分重要的意義。
　　 鰱魚(Hypophthalmichthys molitrix)是我國的四大家魚之一，在我國乃至世界上均被廣泛養(yǎng)殖。然而到目前為止，其性別決定類型和性染色體尚未得到確

3、認(rèn)。
　　 本研究以采自河南新鄉(xiāng)市郊區(qū)新發(fā)養(yǎng)殖基地的鰱魚為實驗材料，雌雄分別19尾，選擇420條長10bp的隨機(jī)引物和10對微衛(wèi)星引物分別對鰱魚兩種性別的DNA池和不同個體的基因組DNA進(jìn)行了RAPD指紋分析和微衛(wèi)星掃描。RAPD指紋分析結(jié)果發(fā)現(xiàn)，在隨機(jī)引物S1421擴(kuò)增產(chǎn)物中存在一條雌性特異性條帶。經(jīng)回收、克隆、測序得知此大小為1341bp。據(jù)所得片段堿基序列設(shè)計一對特異性引物，以雌雄個體基因組做模板進(jìn)行PCR擴(kuò)增，同時用管家

4、基因β-actin作陽性對照。結(jié)果表明，僅在雌性個體中出現(xiàn)特異性條帶。利用地高辛對特異性片段進(jìn)行標(biāo)記，進(jìn)行Southern雜交。結(jié)果顯示，陽性信號僅出現(xiàn)在雌性個體中。BLAST分析說明鰱魚的性別特異片段的部分序列與鰱魚的微衛(wèi)星序列DNA(HypophthalmichthysmolitrixmicrosatelliteDNA，cloneHmo39)的部分序列相似性極高，達(dá)81％。而在微衛(wèi)星掃描的結(jié)果中沒有發(fā)現(xiàn)有性別特異條帶的存在。本研究獲