納米氧化鋅對小鼠腸上皮細胞能量蛋白代謝的影響及氧化損傷的保護作用.pdf

1、本試驗以原代培養(yǎng)小鼠腸上皮細胞為實驗模型，研究了納米氧化鋅對小鼠腸上皮細胞能量蛋白代謝以及對氧化損傷的保護作用。研究共包括兩個試驗：試驗一、不同粒徑及濃度納米氧化鋅對小鼠腸上皮細胞能量蛋白代謝的影響；試驗二、不同粒徑及濃度納米氧化鋅對小鼠腸上皮細胞氧化損傷的保護作用。
　　 試驗一將三種粒徑(10-15、50、100nm)的納米氧化鋅，分別設7個處理，按單因素設計，分別在原代培養(yǎng)小鼠腸上皮細胞的培養(yǎng)液中添加濃度為0、0.5、1、

2、2、4、6、8μgml-1同一粒徑的納米氧化鋅，處理時間24h。結果表明：濃度在0.5-6μgml-1的10-15nm氧化鋅能顯著(P＜0.05)提高小鼠腸上皮細胞乳酸脫氫酶(LDH)、琥珀酸脫氫酶(SDH)、Na+,K+-ATP酶活力，表明納米氧化鋅對細胞能量代謝具有促進作用。隨納米氧化鋅添加濃度的提高，細胞MTTOD值、細胞總蛋白含量、培養(yǎng)上清液NH3含量、細胞金屬硫蛋白(MT)含量、谷草轉氨酶(GOT)、谷丙轉氨酶(GPT)、γ-

3、谷氨酰轉移酶(γ-GT)的活力也顯著(P＜0.05)升高，表明納米氧化鋅能促進細胞生長，增強細胞蛋白代謝相關酶活，提高細胞蛋白質的沉積。除細胞MT、Na+,K+-ATP酶、培養(yǎng)上清液NH3含量外，8μgml-1的10-15nm氧化鋅能顯著地降低上述指標(P＜0.05)，表明較高濃度納米氧化鋅對細胞能量和蛋白代謝具有負面影響。50nm和100nm的氧化鋅對小鼠腸上皮細胞能量蛋白代謝的影響與10-15nm氧化鋅相似。相同濃度下，納米氧化鋅的

4、粒徑越小，生物活性越高。以MTTOD值作為評價細胞生長的指標，三種粒徑（10-15、50、100nm）納米氧化鋅的最適添加濃度分別為：4.95、5.29和5.67μgml-1。
　　 試驗二將三種粒徑(10-15、50、100nm)的納米氧化鋅，分別設7個處理，按單因素設計，分別在原代培養(yǎng)小鼠腸上皮細胞的培養(yǎng)液中添加濃度為0、0.5、l、2、4、6、8μgml-1同一粒徑的納米氧化鋅，并加入終濃度為200μmolL-1的過氧化氫

5、(H2O2)。陰性對照組常規(guī)培養(yǎng)，不加納米氧化鋅及H2O2，培養(yǎng)時間均為24h。結果表明：細胞用200μmolL-－1的H2O2處理后，細胞內超氧化物歧化酶(SOD)、過氧化氫酶(CAT)、谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)活力和細胞MTTOD值極顯著(P＜0.01)低于對照組，而培養(yǎng)液中LDH和丙二醛(MDA)含量極顯著(P＜0.01)高于對照組，表明細胞受到顯著的氧化損傷。添加0.5μgml-1至6μgml-1的10-15nm氧化鋅

6、能顯著(P＜0.05)提高細胞MTTOD值；顯著(P＜0.05)降低培養(yǎng)液中LDH和MDA含量，表明納米氧化鋅能保護小鼠腸上皮細胞的完整性，減少細胞膜的脂質過氧化，減輕細胞的氧化損傷。添加0.5μgml-1到6μgml-1的10-15nm氧化鋅顯著(P＜0.05)提高細胞SOD、CAT和GSH-Px活力。表明納米氧化鋅能維持細胞的抗氧化酶活，提高細胞抗氧化的能力。但8μgml-1的10-15nm氧化鋅能極顯著(P＜0.01)降低細胞MT

7、TOD值、SOD、CAT和GSH-Px活力：極顯著(P＜0.01)增加培養(yǎng)液LDH和MDA的含量，說明高濃度的納米氧化鋅不能減輕細胞的氧化損傷。50nm和100nm的氧化鋅對小鼠腸上皮上述指標的影響與10-15nm氧化鋅相似，相同濃度下，納米氧化鋅的粒徑越小，生物活性越高。0-15、50、100nm納米氧化鋅發(fā)揮對細胞氧化損傷最大保護作用以MDA為評價指標的濃度分別為3.97μ.gml-1、4.15μgml-1和4.28μ.gml-1。