美洲鰻鱺與其養(yǎng)殖水體細(xì)菌的耐藥性、抗性基因及整合子的研究.pdf

1、在養(yǎng)殖中不可避免地直接或間接使用過(guò)抗菌藥物，如此養(yǎng)殖出來(lái)的水產(chǎn)品往往攜帶耐藥細(xì)菌，不僅削弱抗菌藥物對(duì)動(dòng)物細(xì)菌性疾病的控制效果，且還存在向人類致病菌傳播耐藥性的潛在風(fēng)險(xiǎn)。本文研究美洲鰻鱺及其養(yǎng)殖水體分離耐藥細(xì)菌，并分析耐藥細(xì)菌的種屬組成、耐藥性、特定耐藥基因及耐藥整合子，進(jìn)而利用傳代實(shí)驗(yàn)研究細(xì)菌耐藥性的消除。
　　經(jīng)抗性平板篩選出108株耐藥菌，由16S rDNA鑒定屬于4綱20個(gè)屬，γ-變形菌綱的氣單胞菌屬（24.1％）、檸檬酸桿

2、菌屬（17.6%）和不動(dòng)桿菌屬（16.7%）的出現(xiàn)頻率最高。
　　對(duì)17種抗菌藥物的藥敏試驗(yàn)結(jié)果顯示，108株耐藥菌株對(duì)阿莫西林的耐藥率高達(dá)90.7%，對(duì)四環(huán)素、抗葉酸類、酰胺醇類、利福平類的耐藥率也在60%~80%之間。93.5%（101/108）的菌株對(duì)3種及以上的藥物具有抗性，其中有兩株對(duì)13種抗菌藥具有抗性，兩株對(duì)14種抗菌藥具有抗性。美洲鰻鱺的腸道、表皮、鰓部及水樣分離菌株的多重耐藥指數(shù)中水樣的最高。分離菌株數(shù)較多菌屬中

3、檸檬酸桿菌屬和克雷伯菌屬的耐藥水平最高，而不動(dòng)桿菌屬則相對(duì)較低。
　　對(duì)29種抗性基因的PCR檢測(cè)結(jié)果顯示，耐藥菌株中耐β-內(nèi)酰胺類藥物的基因blaTEM檢出率高達(dá)100%，耐藥基因tetC和sulI的檢出率也高達(dá)96.3%。其次，aadA和floR的檢出率分別為74.1%和69.4%，qnrB、arr2/3的檢出率在50%左右。此外，在本研究中，所有菌株至少檢測(cè)到兩種抗性基因，其中肺炎克雷伯菌（Klebsiella pneumo

4、niae）C11檢測(cè)到18種抗性基因。
　　108株耐藥菌株中86株含有I型整合子，10株攜帶II型整合子，沒(méi)有檢測(cè)到III型整合子。10株攜帶II型整合子的菌株均同時(shí)攜帶I型整合子。I型整合酶陽(yáng)性菌株有74株成功擴(kuò)增可變區(qū)，其中33株攜帶空整合子，另外41株菌的整合子共含有14種不同基因盒排列。包括一種新的基因盒排列：dfrB4-catB3-blaOXA-10-aadA1，基因盒排列dfrA12-orfF-aadA2分布最為廣泛

5、?；蚝信帕兄袃?yōu)勢(shì)基因盒為dfr和aad基因家族。10株intIII陽(yáng)性菌株全部都擴(kuò)增出可變區(qū)，均含有相同的基因盒排列dfrA1-catB2-sat2-aadA1。
　　耐藥菌株T4以空白MH肉湯進(jìn)行傳代培養(yǎng)，隨著代數(shù)的累加，對(duì)TET耐藥的菌群比例迅速下降。紫外照射不影響T4菌株耐藥性。而低濃度TET和37℃高溫實(shí)驗(yàn)組傳代子的耐藥率基本保持在100%，這意味著低濃度抗生素和高溫等逆境可以保持細(xì)菌耐藥性的穩(wěn)定。此外SDS的存在也不利