哈維氏弧菌胞外產物及鞭毛蛋白的研究.pdf

1、哈維氏弧菌(Vibrio harveyi )是一種能產生單極端鞭毛的革蘭氏陰性桿菌,它是海水養(yǎng)殖中常見的致病菌,由其引起的弧菌病是水產養(yǎng)殖經(jīng)濟動物中最為嚴重的疾病之一,其爆發(fā)性流行可導致多種海水養(yǎng)殖魚蝦貝類大量死亡,造成巨大的經(jīng)濟損失。本論文致力于哈維氏弧菌胞外產物及其鞭毛蛋白免疫原性的研究,主要結果如下：1.以網(wǎng)箱養(yǎng)殖的患潰瘍病青石斑魚(Epinephlus awoara)和斜帶石斑魚(E. coioides)分離的哈維氏弧菌TS-6

2、28菌株為研究對象,采用平板玻璃紙覆蓋技術,獲得該菌株的胞外產物(Extracellular product,ECP),并對其成分進行分析。杯碟法研究表明,哈維氏弧菌TS-628菌株的胞外產物具有酪蛋白酶、明膠蛋白酶、淀粉酶、脂肪酶、卵磷脂酶等多種酶活性和溶血活性,且溶血性物質具有熱不穩(wěn)定性。SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE)及考馬斯亮藍R-250染色分析表明,ECP蛋白譜帶主要集中在分子質量范圍25.0~66.2kDa之間

3、,經(jīng)不同時間培養(yǎng)所獲得的ECP在凝膠上顯示出的蛋白帶幾乎一致。采用復性電泳方法(G-PAGE)分析了哈維氏弧菌及其它4種弧菌屬細菌的ECP蛋白酶活性,結果發(fā)現(xiàn)哈維氏弧菌ECP在酸性條件下(pH4),蛋白酶活性較強,在堿性條件下(pH9),蛋白酶帶明顯減少,活性很弱。在相同的pH條件下,5種弧菌中以副溶血弧菌的ECP蛋白酶活性最強,種類多,分子質量范圍寬；而哈維氏弧菌的蛋白酶帶較少,活性也稍弱。2.采用梯度離心和CsCl等密度超速離心法提

4、取并純化哈維氏弧菌TS-628菌株的鞭毛蛋白(flagellin)。電鏡觀察到鞭毛蛋白呈經(jīng)典的中空絲狀結構,這與其他學者報道的細菌的鞭毛蛋白形態(tài)相似,電鏡下幾乎不見雜質,表明所提純的鞭毛蛋白純度還是比較高。SDS—聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE)及考馬斯亮藍R-250染色分析表明,純化的鞭毛蛋白亞基分子量分別為43、43.5和44kDa。以純化的鞭毛蛋白免疫新西蘭大白兔制備抗血清,dot-ELISA檢測兔抗鞭毛蛋白抗血清效價為1：