養(yǎng)殖鰻鱺病原菌快速診斷試劑盒研制及其應(yīng)用.pdf

1、鰻鱺俗稱鰻魚,是名貴經(jīng)濟(jì)魚類之一,目前中國(guó)鰻鱺養(yǎng)殖產(chǎn)量居世界首位,主要養(yǎng)殖種類為歐洲鰻鱺(Anguilla anguilla(Ldnnaeus))和日本鰻鱺(Anguilla japonica(Temminck etSchlegel)),美洲鰻鱺(Anguilla rostrata(Lesueur))也在某些地區(qū)開始試養(yǎng)。在養(yǎng)殖過程中,各種疾病不斷發(fā)生,其中細(xì)菌性疾病造成的危害最大。但是,目前對(duì)鰻鱺病原菌的現(xiàn)場(chǎng)快速檢測(cè)的試劑盒研究很少,

2、尚無行之有效的方法。本研究利用新制備的10株病原菌的免疫血清和實(shí)驗(yàn)室以前研制的23種免疫血清組成快速診斷試劑盒,并用此試劑盒對(duì)鰻魚主養(yǎng)區(qū)福建省和廣東省的不同地區(qū)、不同時(shí)間、不同規(guī)格的鰻鱺所患病原菌進(jìn)行現(xiàn)場(chǎng)快速檢測(cè)。結(jié)果如下：
　　 ⑴應(yīng)用本實(shí)驗(yàn)室分離得到的10株病原菌免疫注射新西蘭大白兔,獲得了免疫血清效價(jià)達(dá)1024及以上有8種;1種血清效價(jià)為512;1種血清效價(jià)為256。
　　 ⑵將10種免疫血清與本實(shí)驗(yàn)室分離得到29

3、株病原菌(包括制備免疫血清的10株病原菌)進(jìn)行玻片凝集交叉反應(yīng),結(jié)果顯示:沒有交叉反應(yīng)的免疫血清7種,有交叉反應(yīng)的免疫血清3種,交叉菌株的數(shù)量分別為1、2和4株,交叉菌株的凝集效價(jià)與制備血清菌株的凝集效價(jià)比值最高為1/2,最低為1/8。
　　 ⑶用HiTrap Protein A HP親和層析柱在AKTApurifire-100蛋白純化儀器上純化了有交叉反應(yīng)的3種血清,純化后,用純化前后血清蛋白含量的比值計(jì)算出回收率,同時(shí)用純化

4、前后的比活力的比值計(jì)算出純化倍數(shù),結(jié)果顯示:樣品純化后,最高回收率為30％,最低回收率為7.5％,最高純化倍數(shù)為85,最低純化倍數(shù)3.1。并且通過純化,3種血清與29株病原菌的玻片凝集試驗(yàn)無出現(xiàn)明顯的交叉反應(yīng)。
　　 ⑷利用可檢測(cè)33種鰻鱺病原菌的快速診斷試劑盒在福建省四個(gè)地區(qū)(閩東、閩南、閩西、閩北)及廣東省臺(tái)山市對(duì)不同時(shí)間、不同地區(qū)、不同種類的鰻鱺病原菌進(jìn)行現(xiàn)場(chǎng)快速檢測(cè),結(jié)果顯示:福建省歐洲鰻鱺在4～6月和8～10月這兩個(gè)時(shí)

5、間段過檢測(cè)到12株病原菌,其中4～6月檢測(cè)到9株,8～10月檢測(cè)到10株,有6株病原菌不能同時(shí)存在于兩個(gè)時(shí)間段,說明不同時(shí)間鰻鱺所感染的病原菌不同。對(duì)于歐洲鰻鱺,在4～6月份,共檢測(cè)了三個(gè)地區(qū),檢測(cè)到9株病原菌,僅僅有一株病原菌可以在三個(gè)地區(qū)同時(shí)出現(xiàn);在8～10月,共檢測(cè)了四個(gè)地區(qū),檢測(cè)到9株病原菌,有兩株病原菌在四個(gè)地區(qū)同時(shí)出現(xiàn);說明在同一時(shí)間內(nèi)不同地區(qū)的病原菌是有差別的。8～10月對(duì)廣東省臺(tái)山市日本鰻鱺進(jìn)行檢測(cè),檢測(cè)到5株病原菌,其