應(yīng)激誘導(dǎo)對(duì)牛卵母細(xì)胞成熟和凋亡的影響及金屬硫蛋白基因的初步研究.pdf

1、細(xì)胞凋亡是細(xì)胞清除由于自身或外界環(huán)境不良環(huán)境影響產(chǎn)生的不良細(xì)胞的主要途徑之一。體外培養(yǎng)的卵母細(xì)胞易受一些環(huán)境及外源刺激,如氧化劑,機(jī)械刺激,重金屬,生物類的毒素,紫外線等產(chǎn)生一系列的刺激性反應(yīng),包括細(xì)胞轉(zhuǎn)導(dǎo)路徑,基因的表達(dá)和蛋白的合成,細(xì)胞的分裂增殖及凋亡,甚至是壞死；金屬硫蛋白對(duì)細(xì)胞有抗氧化清除自由基的功效,對(duì)細(xì)胞的凋亡起抑制作用。由于環(huán)境的影響,細(xì)胞會(huì)不可避免的受到外界不良環(huán)境的影響,所以通過體外培養(yǎng)卵母細(xì)胞,外源性的添加應(yīng)激誘導(dǎo)的

2、因素從而進(jìn)一步探討其對(duì)卵母細(xì)胞發(fā)育和凋亡的影響,從而可以趨利避害,提高卵母細(xì)胞的成熟率,有利于體外受精,提高早期胚胎的發(fā)育率和附植率,降低不孕不育的比率或胚胎畸變率及流產(chǎn)率。
　　 本研究以牛卵母細(xì)胞為試驗(yàn)材料,應(yīng)用共聚焦顯微鏡、Annexin V-FITC／PI雙染試驗(yàn)、Fluo3／AM和RH123染色、RT-PCR的方法,初步研究CdCl2、紫外線及H2O2對(duì)卵母細(xì)胞體外成熟及凋亡的影響及構(gòu)建金屬硫蛋白基因的過表達(dá)載體得出以

3、下結(jié)論:
　　 1.本實(shí)驗(yàn)首次研究CdCl2對(duì)牛卵母細(xì)胞體外成熟及凋亡的影響。實(shí)驗(yàn)表明,CdCl2對(duì)卵母細(xì)胞的毒性作用呈劑量效應(yīng),隨著其濃度的增加,卵母細(xì)胞凋亡加劇,在CdCl2濃度達(dá)到1.6gg／ml和2.4μg／ml的時(shí)候,與對(duì)照組相比卵母細(xì)胞的凋亡率,成熟率都有明顯的差異(P＜0.05)；隨著CdCl2劑最的升高,其Ca2+熒光強(qiáng)度及線粒體膜電位的熒光強(qiáng)度增強(qiáng),Bcl-2／Bax的比值發(fā)生較為明顯的變化。
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4、.本實(shí)驗(yàn)首次研究紫外線對(duì)牛卵母細(xì)胞體外成熟及凋亡的影響。實(shí)驗(yàn)表明,紫外線對(duì)卵母細(xì)胞的作用呈時(shí)間效應(yīng),隨著其照射的增加,卵母細(xì)胞凋亡加劇,在照射時(shí)間達(dá)到20min和30min的時(shí)候,與對(duì)照組相比卵母細(xì)胞的凋亡率,成熟率都有明顯的薺異(P＜0.05)；隨著照射時(shí)間的延長,其Ca2+熒光強(qiáng)度及線粒體膜電位的熒光強(qiáng)度增強(qiáng),Bcl-2／Bax的比值發(fā)生較為明顯的變化。
　　 3.本實(shí)驗(yàn)首次研究H2O2對(duì)牛卵母細(xì)胞體外成熟及凋亡的影響。實(shí)驗(yàn)