Ghrelin對體外牛卵丘細(xì)胞增殖和卵母細(xì)胞成熟影響的研究.pdf

1、哺乳動物中，Ghrelin被發(fā)現(xiàn)是一種協(xié)調(diào)能量和生殖活動平衡的促進(jìn)食欲的胃腸激素，是生長激素促分泌物受體（Growth hormone secretagogue receptor， GHS-R）的內(nèi)源性配體，主要在胃組織內(nèi)分泌細(xì)胞中分布。近年，在生殖系統(tǒng)中發(fā)現(xiàn)Ghrelin的高表達(dá)，有力的證明Ghrelin在生殖系統(tǒng)中有著比較重要的位置。卵母細(xì)胞的成熟與發(fā)育是哺乳動物進(jìn)行體外受精及胚胎發(fā)育的先決條件，但是，卵母細(xì)胞成熟過程受到多重因素的

2、影響。Ghrelin作為近年發(fā)現(xiàn)的新型激素，在一定程度上影響著生殖系統(tǒng)。因此，探索Ghrelin在卵母細(xì)胞成熟過程中的潛在作用對于促進(jìn)體外受精等相關(guān)胚胎工程技術(shù)的發(fā)展和應(yīng)用有著重要的理論與實踐指導(dǎo)意義。
　　研究表明Ghrelin和GHS-R主要在卵巢具有分泌類固醇的黃體細(xì)胞和間隙細(xì)胞中表達(dá)，在卵母細(xì)胞中也有Ghrelin和其受體的表達(dá)。而且Ghrelin在體外刺激顆粒細(xì)胞增殖和抑制其凋亡而促進(jìn)卵泡發(fā)育，并且抑制卵母細(xì)胞成熟。Gh

3、relin是否參與牛卵母細(xì)胞成熟，是否可以促進(jìn)牛卵丘細(xì)胞增殖，未見報道。本研究以牛卵丘卵母細(xì)胞復(fù)合體（COCs）為研究對象，運用免疫熒光染色和激光共聚焦掃描技術(shù)、熒光定量RT-PCR、細(xì)胞增殖活性檢測和Western Blotting等方法對體外成熟過程中Ghrelin和GHS-R1a在牛卵母細(xì)胞和卵丘細(xì)胞中的表達(dá)情況進(jìn)行研究，并在體外培養(yǎng)條件下，添加Ghrelin和其受體抑制劑（[D-Lys3]-GHRP-6），觀察其對卵母細(xì)胞成熟和

4、卵丘細(xì)胞增殖的影響。結(jié)果如下：
　　1. Ghrelin蛋白在牛卵母細(xì)胞胞質(zhì)中表達(dá)，而GHS-R蛋白則特異性的定位于卵母細(xì)胞膜表面，在卵丘細(xì)胞中均有Ghrelin和GHS-R蛋白表達(dá)。
　　2.體外成熟過程中卵母細(xì)胞Ghrelin和GHS-R1a mRNA相對表達(dá)量隨著成熟進(jìn)程顯著下降；卵丘細(xì)胞中，Ghrelin mRNA表達(dá)量隨著成熟時間在8h顯著增加然后在16h顯著下降，而GHS-R1a mRNA表達(dá)量隨著成熟時間逐漸增

5、加。
　　3. FSH抑制卵母細(xì)胞Ghrelin和GHS-R1a mRNA表達(dá)，而FSH顯著促進(jìn)卵丘細(xì)胞Ghrelin和GHS-R1a mRNA表達(dá)；FSHBI解除FSH對卵母細(xì)胞Ghrelin和GHS-R1a mRNA表達(dá)的抑制作用和FSH對卵丘細(xì)胞Ghrelin和GHS-R1a mRNA表達(dá)的促進(jìn)作用。
　　4. Ghrelin和 FSH顯著促進(jìn)卵丘細(xì)胞表達(dá) PCNA和 BCL-2 mRNA，而[D-Lys3]-GHRP

6、-6的添加促使PCNA和BCL-2 mRNA水平顯著降低（P<0.05）；[D-Lys3]-GHRP-6和FSH對凋亡基因BAX mRNA的表達(dá)無作用，Ghrelin顯著抑制BAX mRNA的表達(dá)，[D-Lys3]-GHRP-6解除Ghrelin對BAX表達(dá)的抑制作用（P<0.05）。
　　5. Ghrelin刺激卵丘細(xì)胞PCNA蛋白表達(dá)，而[D-Lys3]-GHRP-6抑制Ghrelin對PCNA表達(dá)的促進(jìn)作用。
　　6.