豬骨骼肌MyHC-Ⅱb基因上調(diào)表達(dá)的分子機(jī)制研究.pdf

1、哺乳動(dòng)物骨骼肌是由各種不同類(lèi)型的肌纖維鑲嵌而成的，而不同類(lèi)型肌球蛋白重鏈(Myosin heavy chain，MyHC)的表達(dá)情況是造成不同類(lèi)型肌纖維的主要原因。目前已知的肌球蛋白重鏈家族包含8種亞型，其中MyHC-Ⅱb在商品豬中的表達(dá)量要顯著高于其在中國(guó)地方豬種中的表達(dá)量，然而造成這種差異表達(dá)的內(nèi)在機(jī)制尚且無(wú)人研究。本研究使用qRT-PCR、C2C12細(xì)胞轉(zhuǎn)染、熒光素酶檢測(cè)以及Western Blot等方法，對(duì)商品豬中MyHC-Ⅱb

2、基因表達(dá)上調(diào)的因素進(jìn)行了初步的分析。
　　結(jié)果如下:
　　1使用熒光定量PCR的方法比較了萊蕪豬(n=5)和大長(zhǎng)雜交豬(n=4)背最長(zhǎng)肌中MyHC-Ⅱb mRNA的表達(dá)情況，發(fā)現(xiàn)MyHC-Ⅱb mRNA在大長(zhǎng)雜交豬中的表達(dá)量顯著高于其在萊蕪豬中的表達(dá)量(P=0.013＜0.05)。
　　2刪除實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明從轉(zhuǎn)錄起始位點(diǎn)上游-1024bp刪除到-187 bp之后，MyHC-Ⅱb表達(dá)量顯著下降，分析發(fā)現(xiàn)在這段啟動(dòng)子區(qū)域內(nèi)存

3、在三個(gè)E-box序列，分別突變這3個(gè)E-box序列，結(jié)果使得MyHC-Ⅱb表達(dá)量都顯著下降(P=0.036＜0.05)。
　　3另外，在MyHC-Ⅱb上游啟動(dòng)子區(qū)-1398 bp處發(fā)現(xiàn)一個(gè)G＞T的突變，檢測(cè)了64頭萊蕪豬發(fā)現(xiàn)該位點(diǎn)全部為GG型，65頭長(zhǎng)白豬中13頭為GG型(～20％)，16頭為T(mén)T型(～24.6％)，36頭為GT型(～55.4％)，突變?cè)撐稽c(diǎn)(G＞T)，發(fā)現(xiàn)突變之后有增加MyHC-Ⅱb表達(dá)的趨勢(shì)。
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