FAK信號通路調(diào)控豬骨骼肌衛(wèi)星細胞遷移和粘附的分子機制.pdf

1、為研究不同品種豬骨骼肌衛(wèi)星細胞遷移和粘附差異的分子機制，本試驗以華南地方品種藍塘豬和外來品種長白豬背最長肌的骨骼肌衛(wèi)星細胞為試驗材料，利用細胞劃痕試驗和transwell小室遷移試驗，比較兩品種豬骨骼肌衛(wèi)星細胞的遷移能力；細胞外基質(zhì)（Fn）-細胞粘附試驗，比較兩品種豬骨骼肌衛(wèi)星細胞的粘附能力；運用細胞免疫熒光技術(shù)，檢測兩品種豬骨骼肌衛(wèi)星細胞粘著斑和F-肌動蛋白的表達；采用Western blot技術(shù)，檢測兩種衛(wèi)星細胞遷移24 h和粘附2

2、 h時間點FAK/paxillin信號通路的蛋白表達情況，結(jié)合實時熒光定量PCR技術(shù)檢測兩種衛(wèi)星細胞粘附2 h時整合素（ITGB）關(guān)鍵基因的表達；同時以藍塘豬骨骼肌衛(wèi)星細胞為材料，選用 p-FAK特異性抑制劑PF-573228，分別以0、5和10μmol/L濃度處理藍塘豬骨骼肌衛(wèi)星細胞24 h，檢測其對衛(wèi)星細胞遷移和粘附的影響，以及粘著斑、F-肌動蛋白和FAK信號通路相關(guān)蛋白的表達變化。
　　試驗結(jié)果如下：
　　（1）細胞劃

3、痕試驗和transwell小室遷移試驗表明，藍塘豬骨骼肌衛(wèi)星細胞的遷移能力顯著強于長白豬骨骼肌衛(wèi)星細胞；細胞外基質(zhì)-細胞粘附試驗表明，藍塘豬骨骼肌衛(wèi)星細胞的粘附能力顯著強于長白豬骨骼肌衛(wèi)星細胞。
　?。?）細胞免疫熒光結(jié)果表明，相比于長白豬骨骼肌衛(wèi)星細胞，藍塘豬骨骼肌衛(wèi)星細胞的粘著斑表達更豐富，而F-肌動蛋白的表達量更低。
　?。?）藍塘豬骨骼肌衛(wèi)星細胞在遷移24 h的p-FAK（Tyr397）和p-paxillin（Tyr

4、118）蛋白表達顯著高于長白豬骨骼肌衛(wèi)星細胞；藍塘豬骨骼肌衛(wèi)星細胞在粘附2 h的p-FAK（Tyr397），p-paxillin（Tyr118）和p-Akt（Ser473）蛋白表達顯著高于長白豬骨骼肌衛(wèi)星細胞，粘附基因ITGB3存在差異的趨勢。
　　（4）以10μmol/LPF573228濃度處理藍塘豬骨骼肌衛(wèi)星細胞24 h，能顯著抑制p-FAK（Tyr397）的蛋白表達；且5和10μmol/L PF-573228處理能顯著抑制骨

5、骼肌衛(wèi)星細胞的遷移能力，骨骼肌衛(wèi)星細胞在10μmol/L PF-573228處理濃度下，細胞粘附能力受到抑制。
　?。?）與對照組相比，PF-573228以5和10μmol/L濃度處理衛(wèi)星細胞能降低粘著斑的數(shù)量，抑制p-paxillin（Tyr118）和p-Akt（Ser473）的蛋白表達，不影響F-肌動蛋白的變化。
　　以上結(jié)果說明：藍塘豬和長白豬骨骼肌衛(wèi)星細胞遷移和粘附的差異與粘著斑和 F-肌動蛋白的形成密切相關(guān)，F(xiàn)AK