IL-10在PCV2感染與復(fù)制中的調(diào)控作用.pdf

1、白細(xì)胞介素-10(interleukin-10，IL-10)是機(jī)體重要的抑炎因子，它的抗炎調(diào)控機(jī)制是以調(diào)控體內(nèi)的炎癥平衡為核心目標(biāo)，但卻可以被多種病原微生物運(yùn)用以逃避機(jī)體的免疫識(shí)別與清除。豬圓環(huán)病毒2型(procine circovirus type2，PCV2)是引起以斷奶仔豬多系統(tǒng)衰竭綜合征為主要特征的豬圓環(huán)病毒病的主要病原，發(fā)病豬的典型病變特點(diǎn)是機(jī)體免疫功能低下和淋巴細(xì)胞缺失等。PCV2感染豬的外周血和組織中高表達(dá)IL-10，作為

2、機(jī)體重要的調(diào)控因子，IL-10在PCV2感染引發(fā)豬圓環(huán)病毒病的過(guò)程中可能發(fā)揮著重要的調(diào)控作用，但在PCV2的感染與致病過(guò)程中IL-10究竟發(fā)揮何種調(diào)控作用，IL-10對(duì)淋巴細(xì)胞（T細(xì)胞、B細(xì)胞和NK細(xì)胞）的變化產(chǎn)生什么影響，目前還不清楚。本試驗(yàn)以野生型C57BL/6小鼠和il10-/-型C57BL/6小鼠為模式動(dòng)物，首先通過(guò)接種PCV2建立PCV2感染小鼠模型，Real-time PCR檢測(cè)PCV2在小鼠體內(nèi)的復(fù)制情況，western

3、blotting檢測(cè)小鼠體內(nèi)Cap蛋白的表達(dá)情況，組織切片鑒定PCV2感染小鼠模型的組織病變;然后復(fù)制il10-/-型C57BL/6小鼠的PCV2感染模型，運(yùn)用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)小鼠體內(nèi)的淋巴細(xì)胞（T細(xì)胞、B細(xì)胞和NK細(xì)胞）的亞群分布和絕對(duì)數(shù)目，通過(guò)與Mock組小鼠對(duì)比，確定il10基因缺失對(duì)PCV2感染、復(fù)制和致病過(guò)程的調(diào)控作用。研究取得如下結(jié)果。
　　1.通過(guò)給小鼠接種PCV2成功建立了PCV2感染的野生型C57BL/6小鼠模型。

4、小鼠滴鼻接種PCV2后，在小鼠的外周血、下頜淋巴結(jié)、肺臟和肝臟檢測(cè)到PCV2ORF2;Real-time PCR檢測(cè)感染小鼠肺臟中的病毒載量顯示，在PCV2感染后2周和4周時(shí)病毒DNA水平顯著高于感染1周時(shí)病毒DNA水平，但感染4周時(shí)病毒DNA水平下降到2周時(shí)的一半。同時(shí)，在小鼠肺臟、肝臟和下頜淋巴結(jié)中western blotting均檢測(cè)到Cap蛋白。鏡下觀察小鼠的組織切片可見(jiàn)，PCV2感染小鼠1、2和4周后肺臟組織肺泡間隔增寬，肺泡

5、間隔有不同程度的淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)，表現(xiàn)為間質(zhì)性肺炎特征。觀察小鼠淋巴結(jié)病理變化，PCV2感染后1周時(shí)，小鼠淋巴結(jié)中淋巴細(xì)胞開(kāi)始出現(xiàn)減少;感染后2周，淋巴細(xì)胞進(jìn)一步減少，但在感染后4周，淋巴結(jié)中淋巴細(xì)胞數(shù)量有所恢復(fù)。
　　2.成功建立了PCV2感染il10-/-型C57BL/6小鼠模型。在PCV2感染野生型C57BL/6小鼠中，檢測(cè)到PCV2病毒拷貝數(shù)在持續(xù)增加，而il10-/-型C57BL/6小鼠的肺組織病毒載量在感染后2周達(dá)到最高水

6、平（**P＜0.01），而在感染后4周又急劇下降（&&＜0.01），且顯著低于第1周的病毒載量（*P＜0.05）。western blotting檢測(cè)結(jié)果顯示，在PCV2感染的野生型小鼠和il10-/-型小鼠的肺臟、肝臟和下頜淋巴結(jié)中均有Cap蛋白的表達(dá)。il10-/-型小鼠在PCV2感染后肺臟的組織病理變化規(guī)律與野生型小鼠也基本相似，但是與野生小鼠相比，在PCV2接種后2周肺組織中炎性細(xì)胞浸潤(rùn)更加顯著，而在PCV2接種后4周肺組織病變

7、明顯減輕。
　　3.PCV2感染后分別取野生型小鼠和il10-/-型小鼠肺臟和脾臟的單個(gè)核細(xì)胞，流式檢測(cè)結(jié)果如下:1）PCV2感染減少脾臟CD45+細(xì)胞，il10基因缺失能夠阻止感染后4周脾臟中CD45+細(xì)胞的減少，減少感染后2周肺組織中CD45+細(xì)胞數(shù)目和增加感染后4周肺組織中CD45+細(xì)胞數(shù)目;2）PCV2感染主要增加2周時(shí)脾臟CD3+ CD4+T細(xì)胞和CD3+CD8+T細(xì)胞的數(shù)目和比例，il10基因缺失主要影響感染后4周脾臟

8、中CD3+ CD4+T細(xì)胞的數(shù)目，而在整個(gè)感染過(guò)程中對(duì)CD3+ CD8+T沒(méi)有顯著影響;3）PCV2感染增加肺臟CD3+CD4+T細(xì)胞的數(shù)目和比例，而對(duì)CD3+ CD8+T細(xì)胞數(shù)目無(wú)顯著影響，il10基因缺失使感染后2周肺組織CD3+ CD4+T細(xì)胞數(shù)目和比例顯著高于野生型小鼠，同時(shí)使感染后2周肺組織CD3+ CD8+T細(xì)胞數(shù)目/比例顯著高于Mock感染組和感染的野生型小鼠;4) PCV2感染不影響脾臟NK數(shù)目，il10基因缺失使感染后

9、2周和4周脾臟NK細(xì)胞數(shù)目顯著增加，同時(shí)il10基因缺失使感染后2周肺組織NK細(xì)胞比例顯著減少、感染后4周又顯著增加;5）PCV2感染減少野生型小鼠脾臟中的B淋巴細(xì)胞數(shù)目和比例，il10基因缺失不能改變B淋巴細(xì)胞的這一變化趨勢(shì);PCV2感染增加野生型小鼠肺臟中的B淋巴細(xì)胞數(shù)目，il10基因缺失也未能改變B淋巴細(xì)胞的這一變化趨勢(shì)。
　　綜合以上結(jié)果，本研究工作成功建立了PCV2感染C57BL/6小鼠模型。通過(guò)比較PCV2感染的野生型