IL-10在PCV2感染與復制中的調(diào)控作用.pdf

1、白細胞介素-10(interleukin-10，IL-10)是機體重要的抑炎因子，它的抗炎調(diào)控機制是以調(diào)控體內(nèi)的炎癥平衡為核心目標，但卻可以被多種病原微生物運用以逃避機體的免疫識別與清除。豬圓環(huán)病毒2型(procine circovirus type2，PCV2)是引起以斷奶仔豬多系統(tǒng)衰竭綜合征為主要特征的豬圓環(huán)病毒病的主要病原，發(fā)病豬的典型病變特點是機體免疫功能低下和淋巴細胞缺失等。PCV2感染豬的外周血和組織中高表達IL-10，作為

2、機體重要的調(diào)控因子，IL-10在PCV2感染引發(fā)豬圓環(huán)病毒病的過程中可能發(fā)揮著重要的調(diào)控作用，但在PCV2的感染與致病過程中IL-10究竟發(fā)揮何種調(diào)控作用，IL-10對淋巴細胞（T細胞、B細胞和NK細胞）的變化產(chǎn)生什么影響，目前還不清楚。本試驗以野生型C57BL/6小鼠和il10-/-型C57BL/6小鼠為模式動物，首先通過接種PCV2建立PCV2感染小鼠模型，Real-time PCR檢測PCV2在小鼠體內(nèi)的復制情況，western

3、blotting檢測小鼠體內(nèi)Cap蛋白的表達情況，組織切片鑒定PCV2感染小鼠模型的組織病變;然后復制il10-/-型C57BL/6小鼠的PCV2感染模型，運用流式細胞術(shù)檢測小鼠體內(nèi)的淋巴細胞（T細胞、B細胞和NK細胞）的亞群分布和絕對數(shù)目，通過與Mock組小鼠對比，確定il10基因缺失對PCV2感染、復制和致病過程的調(diào)控作用。研究取得如下結(jié)果。
　　1.通過給小鼠接種PCV2成功建立了PCV2感染的野生型C57BL/6小鼠模型。

4、小鼠滴鼻接種PCV2后，在小鼠的外周血、下頜淋巴結(jié)、肺臟和肝臟檢測到PCV2ORF2;Real-time PCR檢測感染小鼠肺臟中的病毒載量顯示，在PCV2感染后2周和4周時病毒DNA水平顯著高于感染1周時病毒DNA水平，但感染4周時病毒DNA水平下降到2周時的一半。同時，在小鼠肺臟、肝臟和下頜淋巴結(jié)中western blotting均檢測到Cap蛋白。鏡下觀察小鼠的組織切片可見，PCV2感染小鼠1、2和4周后肺臟組織肺泡間隔增寬，肺泡

5、間隔有不同程度的淋巴細胞浸潤，表現(xiàn)為間質(zhì)性肺炎特征。觀察小鼠淋巴結(jié)病理變化，PCV2感染后1周時，小鼠淋巴結(jié)中淋巴細胞開始出現(xiàn)減少;感染后2周，淋巴細胞進一步減少，但在感染后4周，淋巴結(jié)中淋巴細胞數(shù)量有所恢復。
　　2.成功建立了PCV2感染il10-/-型C57BL/6小鼠模型。在PCV2感染野生型C57BL/6小鼠中，檢測到PCV2病毒拷貝數(shù)在持續(xù)增加，而il10-/-型C57BL/6小鼠的肺組織病毒載量在感染后2周達到最高水

6、平（**P＜0.01），而在感染后4周又急劇下降（&&＜0.01），且顯著低于第1周的病毒載量（*P＜0.05）。western blotting檢測結(jié)果顯示，在PCV2感染的野生型小鼠和il10-/-型小鼠的肺臟、肝臟和下頜淋巴結(jié)中均有Cap蛋白的表達。il10-/-型小鼠在PCV2感染后肺臟的組織病理變化規(guī)律與野生型小鼠也基本相似，但是與野生小鼠相比，在PCV2接種后2周肺組織中炎性細胞浸潤更加顯著，而在PCV2接種后4周肺組織病變

7、明顯減輕。
　　3.PCV2感染后分別取野生型小鼠和il10-/-型小鼠肺臟和脾臟的單個核細胞，流式檢測結(jié)果如下:1）PCV2感染減少脾臟CD45+細胞，il10基因缺失能夠阻止感染后4周脾臟中CD45+細胞的減少，減少感染后2周肺組織中CD45+細胞數(shù)目和增加感染后4周肺組織中CD45+細胞數(shù)目;2）PCV2感染主要增加2周時脾臟CD3+ CD4+T細胞和CD3+CD8+T細胞的數(shù)目和比例，il10基因缺失主要影響感染后4周脾臟

8、中CD3+ CD4+T細胞的數(shù)目，而在整個感染過程中對CD3+ CD8+T沒有顯著影響;3）PCV2感染增加肺臟CD3+CD4+T細胞的數(shù)目和比例，而對CD3+ CD8+T細胞數(shù)目無顯著影響，il10基因缺失使感染后2周肺組織CD3+ CD4+T細胞數(shù)目和比例顯著高于野生型小鼠，同時使感染后2周肺組織CD3+ CD8+T細胞數(shù)目/比例顯著高于Mock感染組和感染的野生型小鼠;4) PCV2感染不影響脾臟NK數(shù)目，il10基因缺失使感染后

9、2周和4周脾臟NK細胞數(shù)目顯著增加，同時il10基因缺失使感染后2周肺組織NK細胞比例顯著減少、感染后4周又顯著增加;5）PCV2感染減少野生型小鼠脾臟中的B淋巴細胞數(shù)目和比例，il10基因缺失不能改變B淋巴細胞的這一變化趨勢;PCV2感染增加野生型小鼠肺臟中的B淋巴細胞數(shù)目，il10基因缺失也未能改變B淋巴細胞的這一變化趨勢。
　　綜合以上結(jié)果，本研究工作成功建立了PCV2感染C57BL/6小鼠模型。通過比較PCV2感染的野生型