磷壁酸在金黃色葡萄球菌與腸黏膜細(xì)胞互作過程中的作用.pdf

1、脂磷壁酸(Lipoteichoic acid，LTA)作為革蘭氏陽性菌胞壁共有的一種特有成分，在金黃色葡萄球菌(Staphylococcus aureus，SAU)的致病過程中發(fā)揮重要作用。本論文旨在研究用TrionⅩ-114法提取的磷壁酸在金黃色葡萄球菌與腸黏膜上皮細(xì)胞互作過程中的作用。
　　試驗(yàn)一:用TrionⅩ-114法提取LTA，經(jīng)DEAE-Sephacel、Sephedex G-10凝膠層析柱純化，得到的LTA通過磷鉬酸

2、法檢測磷含量，紫外掃描儀檢測蛋白質(zhì)和核酸殘留量，并經(jīng)紅外光譜儀和核磁共振儀分析、鑒定LTA的結(jié)構(gòu)。結(jié)果顯示，TrionⅩ-114法提取磷壁酸雖然得率較低，僅為細(xì)菌重量的0.83‰(m/m)，但提取的LTA幾乎無蛋白質(zhì)和核酸殘留，結(jié)構(gòu)完整，含有發(fā)揮黏附和免疫刺激作用的D-丙氨酸。因此，運(yùn)用TrionⅩ-114法能提取結(jié)構(gòu)完整、純度較高的磷壁酸。
　　試驗(yàn)二:分別使用不同濃度的LTA預(yù)處理HT-29細(xì)胞，然后再用不同濃度的金黃色葡萄球

3、菌（FITC標(biāo)記）進(jìn)行黏附試驗(yàn)。結(jié)果顯示，試驗(yàn)組相對(duì)于空白組金黃色葡萄球菌的黏附數(shù)量下降，且隨著LTA濃度的升高而下降。結(jié)果說明，金黃色葡萄球菌在黏附HT-29細(xì)胞過程中，其磷壁酸發(fā)揮著重要作用。
　　試驗(yàn)三:不同濃度的LTA和金黃色葡萄球菌分別處理HT-29細(xì)胞一定時(shí)間，對(duì)炎癥因子的表達(dá)水平和胞外濃度進(jìn)行測定。結(jié)果顯示，兩個(gè)試驗(yàn)組都顯著促進(jìn)了炎癥因子NF-κB、IL-6、IL-8、IL-12、TNF-α和抑制炎癥因子IL-10的

4、表達(dá)，另一抑制炎癥因子Hsp70的表達(dá)水平則無明顯變化。運(yùn)用ELISA技術(shù)，對(duì)細(xì)胞培養(yǎng)基中的IL-6、IL-10、TNF-α、IL-12進(jìn)行檢測，結(jié)果顯示LTA濃度為50μg mL-1、金黃色葡萄球菌濃度為1×107CFU mL-1時(shí)，IL-6、IL-10、TNF-α的濃度最高;LTA濃度為25μg mL-1、金黃色葡萄球菌濃度為1×109CFU mL-1時(shí)，細(xì)胞培養(yǎng)基中IL-12的水平最高。這一結(jié)果說明，磷壁酸在金黃色葡萄球菌與HT-